本文關(guān)鍵詞：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞內(nèi)源性IL-6調(diào)節(jié)OGD損傷星形膠質(zhì)細(xì)胞的機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：第一部分骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分離共培養(yǎng)對(duì)OGD損傷星形膠質(zhì)細(xì)胞的影響目的利用氧糖剝奪(OGD)損傷的星形膠質(zhì)細(xì)胞與MSCs分離共培養(yǎng)模型,探討MSCs對(duì)OGD損傷星形膠質(zhì)細(xì)胞的影響。方法原代大鼠培養(yǎng)星形膠質(zhì)細(xì)胞,利用星形膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志蛋白GFAP對(duì)其進(jìn)行鑒定。建立星形膠質(zhì)細(xì)胞OGD損傷模型,并與MSCs分離共培養(yǎng),同時(shí)以未損傷星形膠質(zhì)細(xì)胞(control組)和單獨(dú)OGD損傷組(OGD組)為對(duì)照。ELISA檢測(cè)共培養(yǎng)上清中IL-6分泌情況,Real-time PCR和western blot分別檢測(cè)IL-6信號(hào)通路相關(guān)因子及Bcl-2. Bax凋亡相關(guān)因子的mRNA及蛋白表達(dá)變化。鈣影像系統(tǒng)檢測(cè)ATP刺激后不同處理組星形膠質(zhì)細(xì)胞胞中Ca2+濃度,CCK-8試劑盒檢測(cè)星形膠質(zhì)細(xì)胞的增殖狀況。結(jié)果(1)經(jīng)GFAP免疫熒光方法鑒定,原代培養(yǎng)的星形膠質(zhì)細(xì)胞純度超過95%。(2)ELISA檢測(cè)顯示MSCs分離共培養(yǎng)后的損傷星形膠質(zhì)細(xì)胞共培養(yǎng)液中IL-6的分泌水平明顯高于OGD組(P0.05)。(3)與MSCs分離共培養(yǎng)后,OGD損傷的星形膠質(zhì)細(xì)胞中凋亡因子Bcl-2表達(dá)水平顯著升高(P0.01), Bax表達(dá)水平略有降低,但Bcl-2/Bax的表達(dá)水平比值卻明顯高于其他兩組(P0.05)。(4) MSCs共培養(yǎng)誘導(dǎo)損傷星形膠質(zhì)細(xì)胞中IL-6信號(hào)通路相關(guān)分子IL-6R和STAT3在mRNA和蛋白表達(dá)水平均呈現(xiàn)顯著上調(diào)。(5)與control組相比,ATP刺激可誘導(dǎo)OGD損傷的星形膠質(zhì)細(xì)胞胞內(nèi)Ca2+水平瞬間升高(P0.001),而MSCs分離共培養(yǎng)可顯著降低OGD損傷細(xì)胞內(nèi)Ca2+水平(P0.05)。(6)OGD損傷后星形膠質(zhì)細(xì)胞增殖加速,而MSCs分離共培養(yǎng)可抑制損傷的星形膠質(zhì)細(xì)胞增殖能力。結(jié)論OGD損傷導(dǎo)致星形膠質(zhì)細(xì)胞Bcl-2/Bax表達(dá)水平比值下降,胞內(nèi)Ca2+濃度增加,細(xì)胞增殖能力上調(diào)；而MSCs分離共培養(yǎng)上調(diào)共培養(yǎng)上清中IL-6分泌水平,激活OGD損傷星形膠質(zhì)細(xì)胞中IL-6R/STAT3信號(hào)通路,提高Bcl-2/Bax的比值,降低損傷細(xì)胞胞內(nèi)Ca2+釋放,抑制損傷星形膠質(zhì)細(xì)胞增殖。第二部分骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞內(nèi)源性IL-6對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞損傷修復(fù)的調(diào)節(jié)目的利用siIL-6 MSCs穩(wěn)定細(xì)胞株,與OGD損傷星形膠質(zhì)細(xì)胞分離共培養(yǎng),闡明MSCs內(nèi)源性IL-6對(duì)損傷星形膠質(zhì)細(xì)胞的作用。方法將siIL-6 MSCs細(xì)胞與OGD損傷星形膠質(zhì)細(xì)胞分離共培養(yǎng),并以GFP MSCs為對(duì)照,ELISA測(cè)定共培養(yǎng)上清中IL-6分泌水平,Real-time PCR和western blotting分別檢測(cè)IL-6信號(hào)通路關(guān)鍵分子IL-6R、STAT3及凋亡相關(guān)因子Bcl-2、Bax的mRNA及蛋白表達(dá)水平,鈣影像系統(tǒng)測(cè)定分離共培養(yǎng)后損傷星形膠質(zhì)細(xì)胞胞內(nèi)Ca2+濃度變化情況,CCK-8試劑盒檢測(cè)損傷星形膠質(zhì)細(xì)胞的增殖情況。結(jié)果(1)siIL-6 MSCs分離共培養(yǎng)可明顯下調(diào)培養(yǎng)上清IL-6的分泌水平(P0.01)。(2)siIL-6 MSCs分離共培養(yǎng)后,OGD損傷星形膠質(zhì)細(xì)胞中IL-6信號(hào)通路關(guān)鍵分子IL-6R與p-STAT3表達(dá)水平均顯著下降(P0.01,P0.01)。(3) OGD損傷星形膠質(zhì)細(xì)胞與siIL-6 MSCs分離共培養(yǎng)后,其凋亡因子Bcl-2的表達(dá)水平明顯低于GFP MSCs組(P 0.01), Bax表達(dá)水平略有增高,但Bcl-2/Bax的表達(dá)水平比值顯著減小,與GFP MSCs組比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.01)。(4) ATP可誘導(dǎo)與siIL-6 MSCs分離共培養(yǎng)后的損傷星形膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)Ca2+釋放明顯增加(P0.05)。(5)siIL-6 MSCs分離共培養(yǎng)促進(jìn)損傷星形膠質(zhì)細(xì)胞增殖能力增強(qiáng)。結(jié)論當(dāng)MSCs中IL-6分泌水平下降時(shí),與其共培養(yǎng)的OGD損傷星形膠質(zhì)細(xì)胞IL-6R/STAT3信號(hào)通路活性減弱,Bcl-2/Bax表達(dá)水平比值下降,胞內(nèi)Ca2+釋放增加,細(xì)胞增殖能力增強(qiáng)。第三部分外源性細(xì)胞因子IL-6對(duì)OGD損傷星形膠質(zhì)細(xì)胞的影響目的應(yīng)用外源性細(xì)胞因子IL-6干預(yù)OGD損傷的星形膠質(zhì)細(xì)胞,比較重組細(xì)胞因子IL-6與MSCs內(nèi)源性分泌IL-6對(duì)損傷星形膠質(zhì)細(xì)胞的作用。方法將重組細(xì)胞因子IL-6處理OGD損傷星形膠質(zhì)細(xì)胞48h,并以IL-6未處理的OGD損傷星形膠質(zhì)細(xì)胞為對(duì)照,ELISA測(cè)定培養(yǎng)上清中IL-6的濃度,western blotting檢測(cè)兩組損傷星形膠質(zhì)細(xì)胞中IL-6信號(hào)通路關(guān)鍵分子IL-6R、STAT3及凋亡相關(guān)因子Bcl-2、Bax的蛋白表達(dá)水平變化。鈣影像系統(tǒng)測(cè)定損傷星形膠質(zhì)細(xì)胞中Ca2+濃度,CCK-8試劑盒檢測(cè)損傷星形膠質(zhì)細(xì)胞的增殖情況。結(jié)果(1)IL-6干預(yù)后,細(xì)胞培養(yǎng)上清中IL-6的濃度盡管較單獨(dú)OGD損傷組有所增高,但經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析無顯著差異(P0.05)。(2)外源性IL-6可顯著上調(diào)IL-6R及磷酸化STAT3的表達(dá)水平。(3)IL-6干預(yù)組細(xì)胞凋亡因子Bcl-2的蛋白表達(dá)水平明顯升高,Bax的表達(dá)水平顯著降低,Bcl-2/Bax表達(dá)水平比值顯著增加,與OGD損傷組比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.01)。(4)ATP刺激可明顯誘導(dǎo)IL-6干預(yù)組中OGD損傷星形膠質(zhì)細(xì)胞胞內(nèi)Ca2+濃度的升高,但其升高幅度與單獨(dú)OGD損傷組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。(5)損傷星形膠質(zhì)細(xì)胞的增殖能力在兩組間無明顯差異。結(jié)論外源性IL-6可誘導(dǎo)IL-6R/STAT3信號(hào)通路激活,增加Bcl-2/Bax表達(dá)水平比值,從而增強(qiáng)OGD損傷星形膠質(zhì)細(xì)胞的抗凋亡能力。但重組細(xì)胞因子IL-6并不影響損傷星形膠質(zhì)細(xì)胞胞質(zhì)中Ca2+的水平,以及活性星形膠質(zhì)細(xì)胞增殖能力。
【關(guān)鍵詞】：OGD損傷 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 星形膠質(zhì)細(xì)胞 白細(xì)胞介素-6信號(hào)通路 凋亡因子 siIL-6 MSCs 分離共培養(yǎng) 白細(xì)胞介素-6 凋亡 鈣影像 Ca~(2+) 增殖 重組細(xì)胞因子IL-6 OGD損傷 IL-6信號(hào)通路 抗凋亡
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R742
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對(duì)照5-6
• 中文摘要6-11
• 英文摘要11-17
• 前言17-22
• 參考文獻(xiàn)19-22
• 第一部分 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分離共培養(yǎng)對(duì)OGD損傷星形膠質(zhì)細(xì)胞的影響22-46
• 1 材料與方法22-34
• 2 結(jié)果34-40
• 3 討論40-42
• 4 小結(jié)42-43
• 參考文獻(xiàn)43-46
• 第二部分 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞內(nèi)源性IL-6對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞損傷修復(fù)的調(diào)節(jié)46-59
• 1 材料與方法46-47
• 2 結(jié)果47-52
• 3 討論52-54
• 4 小結(jié)54-55
• 參考文獻(xiàn)55-59
• 第三部分 外源性細(xì)胞因子IL-6對(duì)OGD損傷星形膠質(zhì)細(xì)胞的影響59-68
• 1 材料與方法59-60
• 2 結(jié)果60-64
• 3 討論64-65
• 4 小結(jié)65-66
• 參考文獻(xiàn)66-68
• 全文總結(jié)68-69
• 文獻(xiàn)綜述69-85
• 參考文獻(xiàn)76-85
• 致謝85-86
• 碩士期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄86

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  本文關(guān)鍵詞：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞內(nèi)源性IL-6調(diào)節(jié)OGD損傷星形膠質(zhì)細(xì)胞的機(jī)制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：378195