本文關(guān)鍵詞：PTEN對膠質(zhì)瘤干細(xì)胞干性特征及侵襲、凋亡影響的實(shí)驗(yàn)研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：一、背景和目的腦膠質(zhì)瘤約占顱內(nèi)腫瘤的46%,腦腫瘤中膠質(zhì)細(xì)胞瘤發(fā)病率最高,也是最具侵襲性、致死性的惡性腫瘤之一。隨著近年來腫瘤干細(xì)胞研究的深入,許多學(xué)者證明了腦膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的存在。腦膠質(zhì)瘤干細(xì)胞是腦膠質(zhì)瘤中的很小一部分細(xì)胞,具有引起腫瘤發(fā)生、維持腫瘤生長、保持腫瘤異質(zhì)性的能力。腫瘤干細(xì)胞可分化成為新的腫瘤細(xì)胞,并且對治療更具抵抗性,因而被視為是腫瘤發(fā)生、復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移的根源。如果傳統(tǒng)治療忽略了這部分細(xì)胞,即使其他大部分腫瘤細(xì)胞都被消滅,腫瘤仍然會面臨著復(fù)發(fā)的可能。因此,殺滅腫瘤干細(xì)胞將是決定腫瘤長期療效的重要環(huán)節(jié),遺憾的是,迄今為止,所有的放療及化療方法均無法殺滅腫瘤干細(xì)胞。腫瘤的發(fā)生是一個復(fù)雜的過程,既有癌基因的異常激活,又有抑癌基因的失活。PTEN基因是繼P53抑癌基因之后發(fā)現(xiàn)的另一個較為廣泛的參與腫瘤瘤發(fā)生發(fā)展的抑癌基因之一。PTEN基因參與腫瘤干細(xì)胞信號通路的調(diào)控,其可能通過作用于PI3K-AKT信號通路或者m TOR信號通路,從而促進(jìn)膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的增殖、自我更新、侵襲等惡性腫瘤的性質(zhì)。有文獻(xiàn)表明PTEN基因在膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的發(fā)生發(fā)展中存在重要的作用,但是其對膠質(zhì)瘤干細(xì)胞具體的影響及機(jī)制未見報(bào)道。因此,我們推測PTEN基因可能具有通過作用于膠質(zhì)瘤干細(xì)胞,抑制了膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的干性特征,從而抑制神經(jīng)膠質(zhì)瘤的發(fā)生發(fā)展。在本研究中,我們不僅探討膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的干性特征及PTEN在膠質(zhì)瘤組織及膠質(zhì)瘤干細(xì)胞中的表達(dá),我們還通過PTEN慢病毒的構(gòu)建,探討PTEN基因?qū)δz質(zhì)瘤干細(xì)胞U87S的干性特征、侵襲、凋亡能力的影響。二、材料和方法1、膠質(zhì)瘤干細(xì)胞U87S的培養(yǎng)及檢測膠質(zhì)瘤干細(xì)胞干性相關(guān)的特性。2、免疫組化、定量PCR法、Western blot法檢測PTEN基因及蛋白在膠質(zhì)瘤組織中及正常腦組織中的表達(dá)。3、PTEN基因慢病毒的構(gòu)建、轉(zhuǎn)染膠質(zhì)瘤干細(xì)胞U87S及轉(zhuǎn)染效率的測定。4、免疫熒光、二次成球、定量PCR法檢測PTEN基因?qū)δz質(zhì)瘤干細(xì)胞U87S干性特征的影響。5、Transwell實(shí)驗(yàn)、Western blot法檢測PTEN基因?qū)δz質(zhì)瘤干細(xì)胞U87S侵襲能力的影響及流式細(xì)胞術(shù)檢測PTEN基因?qū)δz質(zhì)瘤干細(xì)胞早期凋亡的影響。6、應(yīng)用SPSS 17.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,凋亡和侵襲實(shí)驗(yàn)的結(jié)果采用單因素方差分析。檢驗(yàn)水準(zhǔn)為α=0.05三、結(jié)果1、膠質(zhì)瘤干細(xì)胞U87S的培養(yǎng)與鑒定為了研究膠質(zhì)瘤干細(xì)胞,我們采用逆轉(zhuǎn)培養(yǎng)法從膠質(zhì)瘤細(xì)胞株U87中獲得呈懸浮球生長的膠質(zhì)瘤干細(xì)胞。通過免疫熒光技術(shù)檢測膠質(zhì)瘤干細(xì)胞U87S的干細(xì)胞表面標(biāo)記物CD133/A2B5、Nestein、ALDH1、PLAGL2的表達(dá),我們發(fā)現(xiàn)我們培養(yǎng)的膠質(zhì)瘤干細(xì)胞不僅高表達(dá)干細(xì)胞標(biāo)記物,還具有多向分化能力、自我更新能力。以上數(shù)據(jù)表明,我們培養(yǎng)的膠質(zhì)瘤干細(xì)胞滿足干細(xì)胞的特性,滿足下一步實(shí)驗(yàn)的要求。2、PTEN基因及蛋白的表達(dá)我們采用免疫組化、定量PCR法、Western blot法檢測PTEN基因及蛋白在膠質(zhì)瘤組織中及正常腦組織中的表達(dá)。我們發(fā)現(xiàn)PTEN基因在膠質(zhì)瘤組織及膠質(zhì)瘤干細(xì)胞U87S中的表達(dá)明顯低于正常腦組織。為我們下一步的實(shí)驗(yàn)奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。3、PTEN基因?qū)δz質(zhì)瘤干細(xì)胞U87S干性特征的影響。我們采用免疫熒光、二次成球、定量PCR法檢測PTEN基因?qū)δz質(zhì)瘤干細(xì)胞U87S干性特征的影響。我們發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染PTEN基因后膠質(zhì)瘤干細(xì)胞標(biāo)記物(CD133、A2B5、Nestein、SOX2、ALDH1、PLAGL2)的表達(dá)明顯降低,自我更新速率明顯較低。PTEN基因可能通過抑制膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的特性,從而抑制膠質(zhì)瘤的發(fā)生發(fā)展。4、PTEN基因?qū)δz質(zhì)瘤干細(xì)胞U87S侵襲、凋亡能力的影響我們采用Transwell實(shí)驗(yàn)、Western blot法檢測PTEN基因?qū)δz質(zhì)瘤干細(xì)胞U87S侵襲能力的影響及流式細(xì)胞術(shù)檢測PTEN基因?qū)δz質(zhì)瘤干細(xì)胞早期凋亡的影響。我們發(fā)現(xiàn)PTEN基因不僅可以抑制膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的侵襲能力及降低侵襲蛋白MMP2、MMP9的表達(dá),還能誘導(dǎo)膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的早期凋亡。四、結(jié)論在本研究中,我們證明了PTEN作為抑癌基因,通過抑制膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的干性特征、侵襲能力,促進(jìn)膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的凋亡,從而抑制了膠質(zhì)瘤的進(jìn)展。為PTEN基因作為人腦膠質(zhì)瘤干細(xì)胞治療的分子靶標(biāo)提供理論依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：膠質(zhì)瘤 PTEN 膠質(zhì)瘤干細(xì)胞 干性特征 侵襲 凋亡
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R739.41
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-11
• 研究背景11-14
• 參考文獻(xiàn)12-14
• 第一部分 膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)與體外鑒定14-31
• 前言14
• 材料與方法14-24
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果24-28
• 討論28-29
• 本章小結(jié)29
• 參考文獻(xiàn)29-31
• 第二部分PTEN在人腦膠質(zhì)瘤組織及膠質(zhì)瘤干細(xì)胞（U87S）中的表達(dá)31-41
• 前言31
• 材料與方法31-37
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果37-39
• 討論39-40
• 本章小結(jié)40
• 參考文獻(xiàn)40-41
• 第三部分 PTEN 基因抑制膠質(zhì)瘤干細(xì)胞干性特征及對膠質(zhì)瘤干細(xì)胞侵襲、凋亡能力的調(diào)控的實(shí)驗(yàn)研究41-55
• 前言41-42
• 材料與方法42-45
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果45-53
• 討論53-54
• 本章小結(jié)54
• 參考文獻(xiàn)54-55
• 綜述55-62
• 參考文獻(xiàn)59-62
• 攻讀學(xué)位期間公開發(fā)表的論文62-63
• 英文縮寫一覽表63-64
• 致謝64-65

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 Nermin Sumru Bayin;Aram Sandaldjian Modrek;Dimitris George Placantonakis;;Glioblastoma stem cells:Molecular characteristics and therapeutic implications[J];World Journal of Stem Cells;2014年02期

  本文關(guān)鍵詞：PTEN對膠質(zhì)瘤干細(xì)胞干性特征及侵襲、凋亡影響的實(shí)驗(yàn)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：377261