本文關(guān)鍵詞：注射用丹參多酚酸對(duì)急性局灶性腦梗死小鼠血腦屏障的保護(hù)作用及機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:腦卒中是導(dǎo)致人類致殘和致死的主要病因之一,其中以急性腦梗死最為常見(jiàn)。腦水腫是導(dǎo)致急性腦梗死后機(jī)體死亡的首因。大量血管內(nèi)物質(zhì)透過(guò)破壞的血腦屏障涌入腦實(shí)質(zhì),腦容量的急速膨脹導(dǎo)致了機(jī)體的死亡。氧化應(yīng)激損傷血腦屏障,形成血管源性水腫的病理機(jī)制已被充分證明。急性腦梗死發(fā)生后,腦組織內(nèi)積累大量的活性氧自由基,不僅直接攻擊血腦屏障膜結(jié)構(gòu),還觸發(fā)由細(xì)胞膜上的離子通道失活的相關(guān)級(jí)聯(lián)反應(yīng),導(dǎo)致血管的通透性增加,加重腦水腫。減輕腦水腫的治療策略有利于降低急性腦梗死的死亡率和致殘率。因此,開(kāi)發(fā)保護(hù)血腦屏障的藥物有望成為急性腦梗死的有效策略。我們前期研究發(fā)現(xiàn),抗氧化藥物白藜蘆醇、雙環(huán)醇和丹皮酚等可以改善腦梗死后血腦屏障的通透性。注射用丹參多酚酸(salvianolic acids,SAs)是從傳統(tǒng)中藥丹參中提取的多種丹酚酸的水溶性混合物,具有對(duì)抗心肌缺血損傷的作用,廣泛應(yīng)用于治療心肌缺血性疾病。其主要由丹酚酸B(salvianolic acid B,SAB)、丹酚酸D、丹酚酸E、迷迭香酸、紫草酸組成,各單體表現(xiàn)出以較強(qiáng)抗氧化作用為特點(diǎn)的多方面藥理作用。其中SAB已在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中證實(shí)有明確的腦保護(hù)作用。本實(shí)驗(yàn)復(fù)制小鼠永久性大腦中動(dòng)脈栓塞模型(permanent middle cerebr alanery occlusion,p MCAO),應(yīng)用SAs及陽(yáng)性對(duì)照SAB進(jìn)行干預(yù),評(píng)價(jià)腦梗死后血腦屏障滲透性、神經(jīng)功能、腦梗死體積、腦水腫,旨在證實(shí)其腦保護(hù)作用并探討其可能機(jī)制。方法:采用成年健康雄性CD-1小鼠,應(yīng)用改良的Longa線栓法制作小鼠p MCAO模型。實(shí)驗(yàn)一探究SAs的血腦屏障保護(hù)作用。72只小鼠隨機(jī)分為四組(每組18只):Sham組,p MACO組,SAs組(p MACO+SAs 15mg/kg),SAB組(p MACO+SAB 10mg/kg)。藥物干預(yù)組在大腦中動(dòng)脈栓塞后即刻給予藥物腹腔注射,相應(yīng)的p MCAO組與Sham組給予等體積的生理鹽水。其中每組6只于藥物干預(yù)后即刻給予尾靜脈注射2%伊文斯蘭溶液(4ml/kg),24小時(shí)后心臟灌注生理鹽水,留取腦組織進(jìn)行伊文斯蘭滲透量測(cè)定。每組其余12只于術(shù)后24小時(shí)進(jìn)行腦保護(hù)作用檢測(cè):包括神經(jīng)功能評(píng)分,腦水含量測(cè)定以及TTC染色法測(cè)定梗死體積。實(shí)驗(yàn)二進(jìn)行SAs血腦屏障保護(hù)機(jī)制的探索。每組6只同時(shí)進(jìn)行SOD活性和MDA含量檢測(cè),評(píng)定SAs抗氧化能力。每組3只蛋白免疫印跡法測(cè)定claudin-5,occludin,MMP-9和AQP-4蛋白表達(dá)量。結(jié)果:1注射用丹參多酚酸能改善神經(jīng)功能缺損。術(shù)后24小時(shí)對(duì)Sham組、p MCAO組、SAs組、SAB組小鼠進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)分,用Mann Whitney U檢驗(yàn)做統(tǒng)計(jì)分析。除Sham組外梗死各組小鼠均出現(xiàn)評(píng)分各異的左側(cè)肢體偏癱,神經(jīng)功能評(píng)分明顯升高。藥物干預(yù)的SAs和SAB兩組神經(jīng)功能評(píng)分明顯低于p MCAO組,且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。SAs和SAB兩組比較神經(jīng)功能缺損無(wú)明顯差別。提示SAs能改善急性局灶性腦梗死小鼠的神經(jīng)功能缺失,其效果與SAB相當(dāng)。2注射用丹參多酚酸能減輕腦水腫。Sham組梗死側(cè)腦組織水含量為79.67%±1.89%。p MCAO組小鼠梗死側(cè)腦組織含水量明顯升高至84.42%±2.87%(P0.05)。給予藥物干預(yù)后,SAs組和SAB組梗死側(cè)腦組織含水量降至82.49%±2.89%,81.81%±1.68%,與p MCAO組相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。SAs和SAB兩組比較梗死側(cè)腦組織水含量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。提示SAs能減少急性局灶性腦梗死小鼠腦水含量,其效果與SAB相當(dāng)。3注射用丹參多酚酸能降低腦梗死體積。在p MCAO組出現(xiàn)蒼白色梗死區(qū)域。與p MCAO組相比,SAs組和SAB組病變側(cè)梗死體積明顯減小,且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p MCAO vs.SAs,SAB:54.67%±3.14%vs.42.88%±2.75%,37.88%±1.29%,P0.05),而SAs組和SAB組患側(cè)梗死體積差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。提示SAs能降低急性局灶性腦梗死小鼠腦梗死體積,其效果與SAB相當(dāng)。4注射用丹參多酚酸能改善血腦屏障的通透性。在p MCAO術(shù)后24 h,通過(guò)測(cè)量腦中伊文斯蘭的漏出量,來(lái)評(píng)價(jià)血腦屏障的通透性。藍(lán)色區(qū)域表示伊文斯蘭漏出,指示血腦屏障通透性增加。p MCAO組病變側(cè)腦組織血腦屏障通透性明顯增加(P0.05 vs.Sham組)。SAs組和SAB組病變側(cè)腦組織伊文斯蘭透過(guò)量均明顯低于p MCAO(P0.05)。SAs組和SAB組比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。提示SAs能降低急性局灶性腦梗死小鼠血腦屏障通透性,其效果與SAB相當(dāng)。5注射用丹參多酚酸能增加機(jī)體抗氧化能力。本實(shí)驗(yàn)中與Sham組相比,p MCAO組24 h后小鼠梗死側(cè)腦組織勻漿中總SOD和CU-Zn SOD的活性均明顯下降,而SAs組與SAB組可明顯提高兩種SOD活性,減低MDA的含量,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。而SAs組與SAB組之間并無(wú)明顯差異,說(shuō)明SAs可以清除急性局灶性腦梗死后自由基的腦損傷,提高機(jī)體抗氧化損傷的能力,從而發(fā)揮腦保護(hù)作用,其保護(hù)作用與SAB相當(dāng)。6注射用丹參多酚酸對(duì)claudin-5,occludin,MMP-9,AQP-4蛋白表達(dá)量的影響。Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示:腦梗死后24小時(shí)claudin-5和occludin蛋白表達(dá)降低,而MMP-9和AQP-4蛋白表達(dá)升高。藥物干預(yù)后claudin-5和occludin蛋白表達(dá)升高,MMP-9和AQP-4蛋白表達(dá)降低,SAs組與p MCAO組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。而SAs組與SAB組,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論:我們研究發(fā)現(xiàn),注射用丹參多酚酸具有腦保護(hù)作用,能降低腦梗死小鼠神經(jīng)功能缺損,減輕腦水腫,減小腦梗死體積。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),注射用丹參多酚酸能夠減輕梗死后血腦屏障的通透性,下調(diào)腦組織MMP-9和AQP-4的表達(dá)量,上調(diào)claudin-5和occludin表達(dá)量,同時(shí)提高SOD活性并降低MDA含量。保護(hù)作用與陽(yáng)性對(duì)照物SAB相當(dāng)。我們推斷,注射用丹參多酚酸可以通過(guò)提高機(jī)體抗氧化能力,保護(hù)了血腦屏障,減輕腦水腫,進(jìn)而保護(hù)梗死后腦組織。注射用丹參多酚酸有望成為治療急性腦梗死的有效藥物。
【關(guān)鍵詞】：注射用丹參多酚酸 腦梗死 血腦屏障 SOD MDA MMP-9 AQP-4
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R743.3
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-11
• 英文縮寫(xiě)11-12
• 前言12-13
• 材料與方法13-25
• 結(jié)果25-27
• 附圖27-30
• 討論30-33
• 結(jié)論33
• 參考文獻(xiàn)33-38
• 綜述38-50
• 參考文獻(xiàn)45-50
• 致謝50-51
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷51

【共引文獻(xiàn)】

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8 荀，

本文編號(hào)：365627