本文關(guān)鍵詞：EZH2參與調(diào)控膠質(zhì)母細胞瘤對替莫唑胺化療敏感性的機理研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：腦膠質(zhì)瘤是顱內(nèi)最為常見的原發(fā)性腦腫瘤,約2/3為惡性膠質(zhì)瘤。盡管目前常規(guī)手術(shù)、放療和化療等綜合措施取得了長足進步,但膠質(zhì)母細胞瘤(GBM)的2年生存率仍不到30%。臨床上常出現(xiàn)相同級別和相同治療方案的腦膠質(zhì)瘤患者存在明顯預后不同的現(xiàn)象,究其原因可能與腫瘤內(nèi)在的生物特性以及對化療的敏感性密切相關(guān)。近年來腦膠質(zhì)瘤的化療逐步得到重視,TMZ已成為輔助化療中的一線藥物,因此影響化療敏感性以及探討其機理也成為臨床神經(jīng)外科十分關(guān)注的課題之一。果蠅zeste基因增強子同源物2即EZH2作為PRC2的催化亞基,它可以在組蛋白3上的27位賴氨酸上添加3個甲基基團。這種3甲基化后的組蛋白可以導致染色質(zhì)凝集和很多與腫瘤增殖、侵襲性以及血管生成等方面有關(guān)的癌基因或抑癌基因在表觀遺傳學上的激活或沉默。本研究擬體外在U87、U251、T98三個膠質(zhì)母細胞瘤細胞株中分析EZH2的表達差異,構(gòu)建EZH2慢病毒干擾的GBM轉(zhuǎn)染株,建立EZH2表達量不同的GBM細胞株,然后檢測其對替莫唑胺的敏感性的變化,同時進一步測定EZH2的表達水平與DNA損傷修復蛋白表達量的關(guān)系,并通過抑制DNA損傷修復通路中的關(guān)鍵蛋白來檢測GBM對替莫唑胺的敏感性變化,從而探討DNA損傷修復途徑在EZH2調(diào)控GBM對化療耐藥中的作用。實驗分為兩部分:第一部分,研究EZH2表達水平與GBM對TMZ化療敏感性的關(guān)系;第二部分,DNA修復在EZH2調(diào)控GBM對TMZ敏感性中的作用。第一部分EZH2表達水平與GBM對TMZ化療敏感性強弱的關(guān)系目的:研究EZH2與膠質(zhì)瘤化療敏感性之間的關(guān)系,驗證EZH2敲減后的GBM細胞株對TMZ化療敏感性的變化。方法:分別應用Real-time PCR和Western-blot方法檢測EZH2在U87、U251、T98中的m RNA和蛋白表達水平,并應用CCK-8法檢測U87、U251、T98對TMZ的IC50值的不同。構(gòu)建EZH2干擾的慢病毒載體并轉(zhuǎn)染GBM細胞株,用流式細胞學鑒定轉(zhuǎn)染率,RT-PCR和Western-blot方法鑒定EZH2的m RNA和蛋白的敲減效率,并用CCK-8法檢測敲減EZH2后的細胞株對TMZ敏感性的變化。結(jié)果:EZH2的m RNA表達水平依次為U251T98U87,U251與T98之間未達到統(tǒng)計學差異(P0.05),U87分別與U251和T98兩兩之間達到統(tǒng)計學差異(P0.05)。EZH2的蛋白表達水平與其m RNA表達水平高低順序基本相同。U251、T98和U87經(jīng)替莫唑胺處理后測得其IC50值依次降低,U251與T98之間無明顯差異(P0.05),U87與U251之間有顯著差異(P0.05),U87與T98之間有顯著差異(P0.05)。慢病毒轉(zhuǎn)染細胞U87、U251細胞株后的轉(zhuǎn)染率經(jīng)流式細胞術(shù)測得均達99%以上,其相應的EZH2蛋白敲減效率分別達95%和50%。在U87、U251中,敲減EZH2的細胞株對TMZ的IC50值相較于未敲減株明顯降低(P0.05)。結(jié)論:EZH2的高表達使GBM細胞對替莫唑胺的敏感性減弱,敲減EZH2后,U87和U251細胞對TMZ的敏感性均明顯增強。第二部分DNA修復途徑在EZH2調(diào)控的GBM對TMZ敏感性中的作用目的:研究EZH2基因敲減后的DNA修復水平變化及與GBM對TMZ敏感性變化的關(guān)系。方法:建立EZH2敲減的U87、U251細胞株,通過western-blot檢測其MGMT、MSH2、MSH6、ERCC1、XRCC1、PARP1蛋白表達水平的變化,并通過抑制PARP1后用CCK-8法檢測U87、U251(si-EZH2)細胞株對TMZ的IC50值變化。結(jié)果:敲減EZH2的U87細胞株的XRCC1、MSH2、MSH6、PARP1蛋白表達水平較未敲減組明顯降低(P0.05)。而敲減EZH2的U251細胞株MGMT、PARP1蛋白表達水平較未敲減組明顯降低(P0.05)。U87和U251細胞株的si-EZH2+PARP1 i組的IC50值均較si-EZH2組明顯降低(P0.05),PARP1 i組較正常對照組IC50值明顯降低(P0.05),但其與si-EZH2組比較未見明顯變化(P0.05)。經(jīng)TMZ誘導后U87、U251的PARP1蛋白水平隨著加藥時間的延長有所上升且未敲減EZH2組的PARP1蛋白水平較敲減組上升的更為明顯(P0.05)。研究結(jié)果說明:DNA修復蛋白PARP1受抑制后,U87、U251細胞對TMZ的敏感性明顯增加;同時敲減EZH2和抑制PARP1后的U87、U251對TMZ敏感性增加最明顯,且隨著TMZ誘導時間的延長,未敲減組的PARP1蛋白水平較敲減組有明顯的增加。結(jié)論:EZH2蛋白表達水平可影響相關(guān)DNA修復蛋白表達水平,提示EZH2基因可能參與了DNA修復的過程。EZH2通過調(diào)控PARP1表達水平可能是EZH2影響膠質(zhì)瘤細胞對TMZ的敏感性的分子機理之一。
【關(guān)鍵詞】：膠質(zhì)瘤細胞 替莫唑胺 U251 U87 T98 DNA修復 PARP1 敏感性
【學位授予單位】：第二軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R739.41
【目錄】：

• 摘要5-8
• Abstract8-11
• 縮略詞表11-12
• 第一部分 研究EZH2表達水平高低與GBM對TMZ的敏感性之間的關(guān)系12-38
• 前言12-13
• 一、實驗材料與方法13-25
• 二、實驗結(jié)果25-34
• 三、討論34-38
• 第二部分 DNA修復在EZH2調(diào)控的膠質(zhì)瘤細胞對TMZ敏感性中的作用38-47
• 前言38-40
• 一、實驗材料與方法40-41
• 二、實驗結(jié)果41-45
• 三、討論45-47
• 參考文獻47-51
• 全文總結(jié)51-52
• 綜述52-65
• 參考文獻58-65
• 碩士期間發(fā)表論文及參加學術(shù)會議情況65-66
• 致謝66

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

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中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前7條

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  本文關(guān)鍵詞：EZH2參與調(diào)控膠質(zhì)母細胞瘤對替莫唑胺化療敏感性的機理研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：354214