目的:本研究旨在探索FoxM1/ADAM17對(duì)人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)化的作用,探明Fox M1/ADAM17/EGFR作用環(huán)路的活化機(jī)制,為腦膠質(zhì)瘤的臨床診斷、治療提供新的策略。方法:（1）應(yīng)用熒光定量PCR、Western blotting和免疫熒光分別檢測(cè)4種人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞株中Fox M1、ADAM17、間質(zhì)表型標(biāo)志物（FN、N-ca、vimentin、YKL-40）、上皮表型標(biāo)志物E-ca的mRNA、蛋白表達(dá)水平;（2）應(yīng)用CCK8（Cell Counting Kit-8）法、平板細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)分別評(píng)價(jià)細(xì)胞增殖能力、克隆形成能力;（3）應(yīng)用劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell遷移實(shí)驗(yàn)、成骨誘導(dǎo)和成脂誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)分別檢測(cè)細(xì)胞的遷移能力、成骨、成脂分化潛能,評(píng)價(jià)人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)化能力;（4）應(yīng)用雙熒光素酶報(bào)告基因、點(diǎn)突變技術(shù)、染色質(zhì)免疫共沉淀法（ChIP）探明FoxM1對(duì)ADAM17表達(dá)的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制;（5）用Western blotting、基因轉(zhuǎn)染等手段分析FoxM1/ADAM17/EGFR作用環(huán)路中上下游分子的變化,探明Fox M1調(diào)控膠質(zhì)瘤間質(zhì)轉(zhuǎn)化的作用機(jī)制。結(jié)果:（1）SW1783... 

【文章來(lái)源】：江蘇大學(xué)江蘇省

【文章頁(yè)數(shù)】：82 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
英文縮略詞中英文注釋表
第一章 緒論
    1.1 研究背景
        1.1.1 腦膠質(zhì)瘤的分子分型及治療策略
        1.1.2 FoxM1在腦膠質(zhì)瘤發(fā)生發(fā)展中的作用
        1.1.3 ADAM17在膠質(zhì)瘤發(fā)生發(fā)展中的作用
        1.1.4 EGFR/PI3K/AKT在膠質(zhì)瘤發(fā)生發(fā)展中的作用
    1.2 本研究的目的意義、內(nèi)容、技術(shù)路線
        1.2.1 目的意義
        1.2.2 研究?jī)?nèi)容
        1.2.3 技術(shù)路線圖
第二章 FoxM1通過(guò)ADAM17促進(jìn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞生長(zhǎng)
    2.1 材料和試劑
        2.1.1 主要材料
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 主要儀器
    2.2 方法
        2.2.1 細(xì)胞復(fù)蘇、培養(yǎng)及傳代：
        2.2.2 定量PCR
        2.2.3 Western blotting
        2.2.4 免疫熒光
        2.2.5 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        2.2.6 篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞
        2.2.7 CCK8
        2.2.8 克隆形成實(shí)驗(yàn)
        2.2.9 構(gòu)建含有FoxM1結(jié)合位點(diǎn)的ADAM17啟動(dòng)子區(qū)域報(bào)告基因及其突變體
        2.2.10 染色質(zhì)免疫共沉淀
        2.2.11 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 FoxM1、ADAM17在人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞中的表達(dá)
        2.3.2 FoxM1促進(jìn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞生長(zhǎng)
        2.3.3 ADAM17促進(jìn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞生長(zhǎng)
        2.3.4 FoxM1通過(guò)結(jié)合ADAM17啟動(dòng)子促進(jìn)了其表達(dá)
    2.4 討論
第三章 FoxM1/ADAM17途徑促進(jìn)人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)化
    3.1 材料和試劑
        3.1.1 主要材料
        3.1.2 主要試劑
        3.1.3 主要儀器
    3.2 方法
        3.2.1 細(xì)胞復(fù)蘇、培養(yǎng)及傳代
        3.2.2 定量PCR
        3.2.3 Western blotting
        3.2.4 Transwell
        3.2.5 成骨誘導(dǎo)
        3.2.6 成脂誘導(dǎo)
        3.2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞中間質(zhì)表型標(biāo)志物與FoxM1、ADAM17的相關(guān)性
        3.3.2 不同膠質(zhì)瘤細(xì)胞株遷移能力、成骨、成脂誘導(dǎo)分化潛能比較
        3.3.3 FoxM1促進(jìn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)化
        3.3.4 FoxM1調(diào)控了膠質(zhì)瘤細(xì)胞間質(zhì)表型標(biāo)志物的表達(dá)
        3.3.5 ADAM17促進(jìn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)化
        3.3.6 ADAM17調(diào)控了膠質(zhì)瘤細(xì)胞間質(zhì)表型標(biāo)志物的表達(dá)
        3.3.7 FoxM1通過(guò)ADAM17促進(jìn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)化
    3.4 討論
第四章 FoxM1/ADAM17/EGFR作用環(huán)路的活化機(jī)制
    4.1 材料和試劑
        4.1.1 主要材料
        4.1.2 主要試劑
        4.1.3 主要儀器
    4.2 方法
        4.2.1 細(xì)胞復(fù)蘇、培養(yǎng)及傳代
        4.2.2 Western blotting
        4.2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    4.3 結(jié)果
        4.3.1 FoxM1調(diào)控了ADAM17/EGFR/AKT信號(hào)通路
        4.3.2 FoxM1通過(guò)ADAM17調(diào)控了EGFR/AKT信號(hào)通路
        4.3.3 ADAM17/EGFR/GSK3β 通路維持了FoxM1高表達(dá)
    4.4 討論
結(jié)論與展望
參考文獻(xiàn)
致謝
在校期間發(fā)表論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]FoxM1 overexpression promotes epithelial-mesenchymal transition and metastasis of hepatocellular carcinoma[J]. Fan-Di Meng,Ji-Chao Wei,Kai Qu,Zhi-Xin Wang,Qi-Fei Wu,Ming-Hui Tai,Hao-Chen Liu,Rui-Yao Zhang,Chang Liu.  World Journal of Gastroenterology. 2015(01)
[2]ADAM17在腦膠質(zhì)瘤中表達(dá)的研究[J]. 張艷,張雪鵬,呂捷,楊艷君.  腫瘤學(xué)雜志. 2013(04)
[3]EGFR信號(hào)通路調(diào)控人膠質(zhì)瘤U87細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制[J]. 邢細(xì)紅,曾暉,王雄偉,郭東生,汪雷,萬(wàn)志先,李燾,周紅建.  重慶醫(yī)學(xué). 2012(18)
[4]EGF和AG1478對(duì)GL15細(xì)胞增殖、侵襲和GFAP表達(dá)的影響[J]. 席桂發(fā),王寶峰,王和平,葉飛,郭東生,雷霆.  中華神經(jīng)外科疾病研究雜志. 2007(04)
[5]膠質(zhì)瘤中EGFR擴(kuò)增、過(guò)表達(dá)及其與腫瘤增殖關(guān)系的研究[J]. 董倫,浦佩玉,王虎,康春生,王廣秀.  中華神經(jīng)醫(yī)學(xué)雜志. 2005(12)

博士論文
[1]轉(zhuǎn)錄因子FOXM1在腫瘤細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化過(guò)程中的功能研究[D]. 楊潮.湖南大學(xué) 2013

碩士論文
[1]ADAM17在U87膠質(zhì)瘤干細(xì)胞遷移和侵襲中的作用及機(jī)制[D]. 陳祥榮.南方醫(yī)科大學(xué) 2013
[2]PI3K抑制劑LY294002逆轉(zhuǎn)卵巢癌細(xì)胞紫杉醇化療耐藥以及對(duì)紡錘體檢測(cè)點(diǎn)蛋白Mad2表達(dá)的影響[D]. 周志剛.華中科技大學(xué) 2010



本文編號(hào)：3186217