本文關鍵詞：電刺激對HCN通道特性影響的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：自從HCN通道被發(fā)現(xiàn)后,它的超極化激活特性立即引起了科學研究者的重視。HCN通道參與了許多神經活動,包括參與調節(jié)神經元活動的節(jié)律性和樹突整合,調控細胞靜息膜電位及突觸傳遞等等。近年來許多研究者將突觸上的NMDA和GABAA受體以及突觸外的氨基酸能遞質受體作為參與癲癇疾病的發(fā)作機制進行研究,探索HCN通道在癲癇疾病中的作用。同時,也有一些研究表明HCN通道的調節(jié)異常可能與許多神經系統(tǒng)疾病有關,例如癲癇、神經病理性疼痛、帕金森綜合癥等等。為了研究癲癇疾病中癲癇樣放電對HCN通道特性的影響,我們通過電刺激實驗,模擬癲癇樣放電,從通道蛋白的分布情況、通道特性及分子機制方面進行研究。研究中,我們利用免疫熒光技術主要研究電刺激對新生鼠海馬神經元細胞中HCN通道分布情況的影響,利用細胞膜片鉗技術研究反復電刺激對HCN單通道開放頻率的影響,并利用ELISA試劑盒研究電刺激對大腦皮層中cAMP含量的影響。實驗結果顯示反復電刺激后HCN4通道在神經元細胞胞體和樹突上分布情況發(fā)生變化,同時反復電刺激使得HCN單通道開放概率的增加。進一步研究發(fā)現(xiàn)這些變化很可能是由于受到cAMP的影響所導致的,表現(xiàn)為電刺激后大腦皮層中cAMP的含量增加,并且在電刺激后抑制cAMP的生成會使得HCN單通道的開放概率降低。上述結果說明電刺激(模擬癲癇樣放電)能夠影響神經信號的傳導速度,表現(xiàn)為神經元細胞膜上HCN通道的分布情況發(fā)生顯著性變化,同時可以增加組織中cAMP的含量。反復的電刺激還會誘導通道激活,增加HCN單通道的開放概率。在傳導速度和通道特性雙重機制的影響下,誘導大量神經元參與產生超同步化放電,而癲癇樣放電中這種超同步化現(xiàn)象是癲癇疾病的一種發(fā)作機制。我們通過電刺激實驗,模擬癲癇樣放電的過程,所得的實驗結果不僅能夠揭示電刺激對HCN通道分布及開放概率的影響,而且有助于解釋癲癇疾病中癲癇樣放電的發(fā)生機制。
【關鍵詞】：HCN通道 癲癇樣放電 電刺激 環(huán)核苷酸腺苷
【學位授予單位】：中南民族大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R741
【目錄】：

• 摘要5-6
• ABSTRACT6-10
• 第一章 緒論10-21
• 1.1 HCN通道的結構10-11
• 1.2 HCN通道在神經系統(tǒng)中的分布11
• 1.3 谷氨酸對HCN通道的影響11-12
• 1.4 HCN通道的研究進展12-14
• 1.5 HCN通道與癲癇14-15
• 1.6 膜片鉗技術15-18
• 1.6.1 膜片鉗技術原理16-17
• 1.6.2 膜片鉗技術的應用17-18
• 1.7 免疫熒光技術18-20
• 1.7.1 免疫熒光技術的原理18-19
• 1.7.2 免疫熒光技術的應用19-20
• 1.8 本課題研究內容20-21
• 第二章 電刺激對新生鼠海馬神經元中HCN通道分布的影響21-29
• 2.1 引言21-22
• 2.2 材料和方法22-26
• 2.2.1 主要試劑22
• 2.2.2 實驗儀器22-23
• 2.2.3 試劑配制23
• 2.2.4 實驗方法23-26
• 2.2.4.1 新生鼠海馬神經元細胞培養(yǎng)23-24
• 2.2.4.2 電刺激實驗24-25
• 2.2.4.3 免疫熒光染色25
• 2.2.4.4 激光共聚焦成像及分析25-26
• 2.3 實驗結果26-28
• 2.4 討論28-29
• 第三章 反復電刺激對HCN單通道開放頻率的影響29-35
• 3.1 引言29-30
• 3.2 材料和方法30-32
• 3.2.1 主要試劑30
• 3.2.2 實驗儀器30
• 3.2.3 試劑配制30
• 3.2.4 實驗方法30-32
• 3.2.4.1 海馬神經元的急性分離30-31
• 3.2.4.2 電生理實驗31-32
• 3.3 實驗結果32-34
• 3.3.1 反復電刺激增加HCN單通道的開放概率32-33
• 3.3.2 腺苷酸環(huán)化酶抑制劑Bupivacaine（布比卡因）對HCN單通道單通道開放概率的影響33-34
• 3.4 討論34-35
• 第四章 電刺激對小鼠大腦皮層中CAMP含量的影響35-40
• 4.1 引言35
• 4.2 材料和方法35-38
• 4.2.1 實驗動物及試劑35
• 4.2.2 實驗儀器35
• 4.2.3 實驗方法35-38
• 4.2.3.1 電刺激實驗35-36
• 4.2.3.2 ELISA試劑盒測定大腦皮層組織中cAMP的含量36-38
• 4.2.3.3 數(shù)據(jù)處理38
• 4.3 實驗結果38-39
• 4.4 討論39-40
• 結論40-42
• 參考文獻42-52
• 致謝52-53
• 附錄A 攻讀學位期間發(fā)表的學術論文53-54
• 附錄B 主要符號和縮略詞54

  本文關鍵詞：電刺激對HCN通道特性影響的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：306241