目的:觀察mTOR抑制劑依維莫司（Everolimus,RAD001）對U251細胞增殖、自噬的影響;同時探討RAD001聯(lián)合替莫唑胺（Temozolomide,TMZ）對U251細胞增殖、自噬的影響;為RAD001在人惡性膠質(zhì)瘤治療方面提供可靠的理論依據(jù)。方法:本實驗分為兩個部分。第一部分我們通過體外實驗探討RAD001對U251細胞增殖、自噬的影響。首先,我們采用了CCK-8法檢測不同工作濃度的RAD001在不同時間段對U251細胞增殖抑制的影響。使用透射電鏡觀測經(jīng)RAD001處理后U251細胞內(nèi)部超微結(jié)構(gòu)的改變。采用免疫熒光觀測經(jīng)RAD001處理后的人膠質(zhì)瘤細胞GFP-LC3融合蛋白的分布情況。再通過Western Blot檢測RAD001對細胞內(nèi)LC3B、Becli n-1、P62蛋白水平的影響。第二部分我們通過體外實驗探討RAD001聯(lián)合TMZ對U251細胞增殖、自噬的影響。我們將U251細胞隨機分為下列三組:空白對照組、TMZ單藥組以及RAD001與TMZ聯(lián)合組,采用CCK-8法了解各組細胞生長抑制情況;應(yīng)用透射電鏡觀測空白對照組、TMZ單藥及聯(lián)合給藥對U251細胞超微結(jié)構(gòu)... 

【文章來源】：甘肅中醫(yī)藥大學(xué)甘肅省

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

RAD001以濃度及時間依賴的方式抑制U251細胞活性的增殖抑制率曲線圖

OR 抑制劑依維莫司聯(lián)合替莫唑胺對惡性膠質(zhì)瘤細胞自噬作用影響的實驗研鏡觀察依維莫司對 U251 細胞超微結(jié)構(gòu)的改變 的 RAD001 處理 U251 細胞 48h 后，使用透射電子顯微自噬溶酶體的形成。從圖 2 中可見大量雙膜結(jié)構(gòu)的自噬體體，里面含有分解的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、線粒體及高爾基復(fù)合物等殘1 能夠誘使 U251 細胞發(fā)生自噬。

21熒光觀測經(jīng) RAD001 處理后的人膠質(zhì)瘤細胞 GFP-LC3 融合蛋粒數(shù)量明顯多于圖 3A 中熒光斑點數(shù)量，圖 3B 中細胞產(chǎn)生的B 的自噬作用更強。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Cancer metabolic reprogramming: importance, main features, and potentials for precise targeted anti-cancer therapies[J]. Liem Minh Phan,Sai-Ching Jim Yeung,Mong-Hong Lee.  Cancer Biology & Medicine. 2014(01)



本文編號：2989582