目的:觀察HER2基因是否通過(guò)PI3K/AKT信號(hào)通路影響惡性腦膜瘤細(xì)胞的增殖、遷移。方法:1、經(jīng)病毒感染分別將沉默和過(guò)表達(dá)HER2基因質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至惡性腦膜瘤IOMM-Lee細(xì)胞株中。實(shí)驗(yàn)分為五組:第一組:空白組（Blank）;第二組:沉默陰性對(duì)照組（NC-sh）;第三組:沉默HER2基因組（HER2-sh）;第四組:過(guò)表達(dá)陰性對(duì)照組（NC-ox）;第五組:過(guò)表達(dá)HER2基因組（HER2-ox）。應(yīng)用q-PCR和Werstern blot檢測(cè)各組細(xì)胞HER2 m RNA和蛋白表達(dá)水平。2、CCK8法檢測(cè)各組細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖情況;Transwell小室遷移法檢測(cè)各組細(xì)胞遷移能力;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組細(xì)胞周期變化。3、Western blot檢測(cè)各組細(xì)胞HER2、PI3K、AKT、P-AKT、m TOR、P-m TOR、S6、P-S6、NF-κB、Cyclin D1、VEGF蛋白的表達(dá)。4、用PI3K抑制劑LY294002、m TOR抑制劑KU0063794不同濃度（終濃度為20、60、100、5、10、20μmol/L）的培養(yǎng)液24、48、72h后,CCK8、Transwell小室遷移實(shí)驗(yàn)檢測(cè)... 

【文章來(lái)源】：南昌大學(xué)江西省 211工程院校

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

慢病毒轉(zhuǎn)染惡性腦膜瘤細(xì)胞MOI值的確定及轉(zhuǎn)染率的測(cè)定

圖 2-2: q-PCR 檢測(cè) HER2 mRNA 的表達(dá)水平。轉(zhuǎn)染后 72h，沉默組細(xì) H平(*P<0.05)；過(guò)表組細(xì)胞 HER2 mRNA 表達(dá)水平(*P<0.05)。2.2.5 Western blot 檢測(cè)各組細(xì)胞 HER2 蛋白的表達(dá)情況6 孔板接種各組細(xì)胞（細(xì)胞數(shù) 1.5×105個(gè)），轉(zhuǎn)染后 96 小時(shí)白，Western blot 結(jié)果示：沉默 HER2-sh 組與 NC-sh 組比較，HER2 蛋白都下降 65.76%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；HE比較，HER2-ox 組的 HER2 蛋白表達(dá)水平升高，約為 NC-ox 組有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）（圖 2-3）。沉默和過(guò)表達(dá) HER2 惡性白水平達(dá)到分組要求，能繼續(xù)進(jìn)行后期實(shí)驗(yàn)。

圖 2-2: q-PCR 檢測(cè) HER2 mRNA 的表達(dá)水平。轉(zhuǎn)染后 72h，沉默組細(xì) HER2 mRNA 表達(dá)平(*P<0.05)；過(guò)表組細(xì)胞 HER2 mRNA 表達(dá)水平(*P<0.05)。2.2.5 Western blot 檢測(cè)各組細(xì)胞 HER2 蛋白的表達(dá)情況6 孔板接種各組細(xì)胞（細(xì)胞數(shù) 1.5×105個(gè)），轉(zhuǎn)染后 96 小時(shí)提取各組細(xì)胞白，Western blot 結(jié)果示：沉默 HER2-sh 組與 NC-sh 組比較，HER2-sh 的細(xì)HER2 蛋白都下降 65.76%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；HER-ox 與 NC-ox比較，HER2-ox 組的 HER2 蛋白表達(dá)水平升高，約為 NC-ox 組的 5.95 倍，差有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）（圖 2-3）。沉默和過(guò)表達(dá) HER2 惡性腦膜瘤細(xì)胞在白水平達(dá)到分組要求，能繼續(xù)進(jìn)行后期實(shí)驗(yàn)。


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