發(fā)布時間：2017-04-09 10:07

  本文關(guān)鍵詞：Siah1與Numbl在膠質(zhì)瘤中的表達及相關(guān)性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的1.研究Siah1和Numbl在膠質(zhì)瘤組織中的表達情況,分析Siah1和Numbl異常表達與膠質(zhì)瘤發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。2.研究膠質(zhì)瘤細胞增殖和遷移過程中Siah1和Numbl蛋白的表達變化及其機制,探討Siah1和Numbl在此過程中的作用。方法1.采用western blot技術(shù)檢測不同級別膠質(zhì)瘤新鮮組織中Siah1和Numbl的表達情況;運用免疫組化方法檢測92例膠質(zhì)瘤組織石蠟切片中Siah1和Numbl的表達情況,并結(jié)合膠質(zhì)瘤臨床病理資料分析Siah1和Numbl與膠質(zhì)瘤患者的年齡、性別、KPS評分、腫瘤位置、手術(shù)切除范圍以及腫瘤分級等因素之間的關(guān)系,并對其進行隨訪,應(yīng)用Kaplan-Meier法分析Siah1和Numbl與膠質(zhì)瘤預后的關(guān)系。構(gòu)建Siah1、Numbl過表達載體,將Siah1和Numbl轉(zhuǎn)染入U87-MG細胞檢測Siah1和Numbl對膠質(zhì)瘤細胞增殖和遷移的影響。2.通過免疫共沉淀方法證明Siah1和Numbl體外的相互作用;通過免疫熒光檢測兩者在U87-MG細胞和U251細胞內(nèi)的共定位;構(gòu)建Siah1的截短突變體,檢測它們相互作用的區(qū)段。3.通過將myc標記的Siah1、HA標記Numbl轉(zhuǎn)染膠質(zhì)瘤細胞,檢測Siah1和Numbl的相互作用對Siah1的作用底物β-catenin降解的調(diào)節(jié)作用。結(jié)果1.Western blot分析顯示,Siah1和Numbl在膠質(zhì)瘤組織中的表達隨級別增高而降低。免疫組化結(jié)果顯示,Siah1和Numbl的表達與膠質(zhì)瘤組織學分級之間有統(tǒng)計學意義(P值分別為0.028、0.022)。Kaplan-Meier分析顯示在膠質(zhì)瘤中Siah1和Numbl的低表達與患者較差的生存預后顯著相關(guān)(P均0.001)。2.通過構(gòu)建Siah1和Numbl的過表達載體并轉(zhuǎn)染入U87-MG細胞,結(jié)果顯示單獨過表達Siah1和Numbl對膠質(zhì)瘤細胞增殖和遷移有抑制作用,共同轉(zhuǎn)染過表達Siah1和Numbl時對膠質(zhì)瘤細胞增殖和遷移的抑制作用更明顯。3.體外HEK293T細胞及膠質(zhì)瘤細胞中的免疫共沉淀以及免疫熒光顯示Siah1和Numbl存在相互作用;通過截短突變檢測到兩者的相互作用區(qū)域發(fā)生在Siah1底物結(jié)合區(qū)SBD段;在膠質(zhì)瘤細胞中檢測到Siah1和Numbl的相互作用協(xié)同促進β-catenin的降解。結(jié)論1.Siah1和Numbl在膠質(zhì)瘤中隨著級別的升高表達降低,低表達Siah1和Numbl的患者預后較差,Siah1和Numbl的表達呈正相關(guān);2.Siah1和Numbl抑制膠質(zhì)瘤細胞的增殖與遷移,協(xié)同作用比單獨對增殖和遷移的作用更加明顯;3.Siah1和Numbl存在相互作用,兩者協(xié)同作用更能降低作用底物β-catenin的量。
【關(guān)鍵詞】：膠質(zhì)瘤 Siah1 Numbl 增殖 遷移
【學位授予單位】：南通大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R739.4
【目錄】：

• 摘要6-8
• Abstract8-11
• 第一章 緒論11-14
• 1.1 課題來源、研究的目的和意義11
• 1.2 國內(nèi)外研究概況11-13
• 1.2.1 國外研究概況11-13
• 1.2.2 國內(nèi)研究概況13
• 1.3 論文的主要研究內(nèi)容13-14
• 第二章 材料和方法14-31
• 2.1 材料14-17
• 2.1.1 組織標本14
• 2.1.2 細胞來源14
• 2.1.3 主要試劑14-16
• 2.1.4 實驗儀器16-17
• 2.2 實驗流程與方法17-31
• 2.2.1 western blot17-19
• 2.2.2 免疫組織化學實驗19-20
• 2.2.3 細胞免疫熒光實驗20
• 2.2.4 RT-PCR20-22
• 2.2.5 Siah1質(zhì)粒全長、截短突變構(gòu)建22-25
• 2.2.6 細胞培養(yǎng)25
• 2.2.7 免疫共沉淀25-26
• 2.2.8 CCK8增殖實驗26
• 2.2.9 細胞周期流式實驗26-27
• 2.2.10 Transwell遷移試驗27
• 2.2.11 細胞劃痕試驗27-28
• 2.2.12 免疫組化結(jié)果判斷28
• 2.2.13 統(tǒng)計學處理28
• 2.2.14 試劑配制28-31
• 第三章 結(jié)果31-43
• 3.1 Siah1和Numbl在膠質(zhì)瘤中的表達及其臨床意義31-36
• 3.1.1 Siah1和Numbl的在膠質(zhì)瘤組織中的表達隨級別升高而降低31-32
• 3.1.2 免疫組化檢測Siah1和Numbl在膠質(zhì)瘤組織中蛋白表達32-35
• 3.1.3 Siah1和Numbl的表達與患者的預后關(guān)系35
• 3.1.4 Siah1和Numbl的相關(guān)性35-36
• 3.2 Siah1和Numbl對膠質(zhì)瘤細胞的影響36-39
• 3.2.1 Siah1和Numbl在膠質(zhì)瘤細胞中的表達36-37
• 3.2.2 Siah1和Numbl轉(zhuǎn)染效率的檢測37
• 3.2.3 Siah1和Numbl協(xié)同作用抑制膠質(zhì)瘤細胞的增殖和遷移37-39
• 3.3 Siah1和Numbl之間的相互作用39-43
• 3.3.1 Siah1和Numbl共定位于細胞漿39-40
• 3.3.2 Siah1和Numbl相互作用的檢測40-42
• 3.3.3 Siah1和Numbl之間的協(xié)同作用和對β-catenin的影響42-43
• 第四章 討論43-47
• 4.1 Siah1和Numbl在膠質(zhì)瘤組織中的表達43-44
• 4.2 Siah1和Numbl對膠質(zhì)瘤細胞的生物學行為影響44-45
• 4.3 Siah1和Numbl之間的相互關(guān)系45-47
• 第五章 結(jié)論47-48
• 參考文獻48-52
• 英文縮略詞表52-53
• 綜述53-64
• 綜述參考文獻60-64
• 在讀碩士學位期間公開發(fā)表的論文與參加的項目64-65
• A：在國內(nèi)外刊物上發(fā)表的論文64
• B：所參加和主持的項目64-65
• 附錄：攻讀學位期間獲得的主要榮譽65-66
• 致謝66

  本文關(guān)鍵詞：Siah1與Numbl在膠質(zhì)瘤中的表達及相關(guān)性研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：295002