背景帕金森�。≒D）是全球散發(fā)的慢性神經退行性疾病。其病因多樣,病理表現為腦內多巴胺能神經元細胞凋亡。殘存細胞內路易小體為該疾病典型病理表現,始終為研究者重視。路易小體實際是神經元出現蛋白代謝功能異常后,自噬溶酶體內突觸核蛋白等物質降解紊亂所遺留的一種特殊病理形式。細胞自噬的分子機制因與細胞的代謝、免疫、營養(yǎng)、應激及死亡等多種機制相關而備受關注。進一步研究中我們發(fā)現,因該疾病中多巴胺能神經元的特殊性,進行動物實驗的誘導劑在相應細胞試驗中較難復制出令人滿意的自噬細胞模型。方法及結果:本研究者通過文獻檢索,首先通過不同濃度魚藤酮對SH-SY5Y細胞進行不同時段誘導篩選,經熒光染色后鏡下凋亡觀察、流式細胞儀計數定量、細胞活性試驗（CCK8法）驗證,自噬誘導后蛋白測定、熒光染色觀察、溶酶體抑制劑反向驗證等多種實驗手段,終選定以特定時長特定濃度魚藤酮對SH-SY5Y細胞誘導,來進行下一步以自噬為中心目的的帕金森病早期的細胞分子生物學研究。在該細胞模型的進一步研究中,我們發(fā)現FOX03a蛋白作為一種復雜功能的轉錄因子,通過磷酸化能活動所致漿核間移動及轉錄的啟動,調控下游因子在SH-SY5Y細胞的自... 

【文章來源】：南方醫(yī)科大學廣東省

【文章頁數】：129 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

圖２－１細胞在２０Ｘ目鏡下?細胞在４０Ｘ目鏡下??Ｆｉｇｕｒｅ?２－１?ｔｈｅ?ｃｅｌｌｓ?ｕｎｄｅｒ?２０Ｘ?ｔｈｅ?ｃｅｌｌｓ?ｕｎｄｅｒ?４０Ｘ??

４）？加入５叫Ａｎｎｅｘｉｎ?Ｖ－ＦＩＴＣ，輕輕混勻。??５）．加入１００碘化丙啶染色液，輕輕混勻。??６）．室溫（２０－２５°Ｃ）避光孵育１０－２０分鐘，隨后置于冰浴中。使用鋁箔進行避??。孵育過程中重懸細胞２－３次以改善染色效果。然后以同法處理同一樣本置??共熒光顯微鏡下檢測：經ｌ〇〇〇ｇ離心５分鐘，收集細胞，用５０－１００４??ｎｎｅｘｉｎ?Ｖ－ＦＩＴＣ結合液輕輕重懸細胞，涂片后，熒光顯微鏡下觀察。??３．３隨即進行流式細胞儀檢測，Ａｎｎｅｘｉｎ?Ｖ－ＦＩＴＣ為綠色熒光，碘化丙啶（ＰＩ）??紅色焚光，??４試驗結果：??４．１凋亡染色下鏡下直接觀察（因圖像素材過多，僅展示較典型圖像供觀者??行定性參考）??建模前，根據鏡下肉眼觀察，了解ＳＨ－ＳＹ５Ｙ細胞在魚藤酮誘導下產生細??死亡。經熒光凋亡雙染色試驗，經熒光共聚焦顯微鏡拍攝（圖２－２至圖２－６）??

對照組(DMS}24H流式細胞儀各項數據


本文編號：2908465