【摘要】：目的:通過檢測(cè)miR-34a與MMP2在腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞株中的表達(dá)情況,探討miR-34a通過其靶基因MMP2對(duì)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞侵襲遷移的影響。方法:采用熒光定量PCR檢測(cè)miR-34a,熒光定量PCR及western blot檢測(cè)MMP2在腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞株中的表達(dá)情況;選取U87與A172,使用miR-34a摸擬物、miR-34a抑制劑進(jìn)行分組轉(zhuǎn)染,通過qRT-PCR觀察miR-34a,qRT-PCR及western blot觀察MMP2的表達(dá)水平;應(yīng)用mRNA數(shù)據(jù)庫(kù)預(yù)測(cè)miR-34a結(jié)合MMP2區(qū)域,然后構(gòu)建出野生型與突變型MMP2 3’UTR熒光素酶質(zhì)粒以及miR-34a質(zhì)粒,采用熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn);通過Transwell侵襲以及劃痕實(shí)驗(yàn)對(duì)U87細(xì)胞侵襲遷移能力進(jìn)行觀察。結(jié)果:(1)各株腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞株內(nèi)MMP2蛋白含量均高表達(dá),其中以U87、A172最明顯,MMP2的mRNA表達(dá)水平與其蛋白基本一致,但miR-34a的mRNA水平的表達(dá)相對(duì)偏低,miR-34a的mRNA表達(dá)水平與MMP2呈負(fù)相關(guān),MMP2可能為miR-34a下游靶基因。(2)將miR-34a mimic、抑制劑轉(zhuǎn)染U87與A172細(xì)胞后,轉(zhuǎn)染mimic細(xì)胞株內(nèi)MMP2的蛋白及mRNA水平均明顯降低,轉(zhuǎn)染抑制劑細(xì)胞株內(nèi)MMP2的蛋白及mRNA水平均明顯升高。(3)將野生型與突變型MMP2 3’UTR區(qū)的熒光素酶質(zhì)粒分別與pcDNA5-miR-34a質(zhì)粒轉(zhuǎn)入U(xiǎn)87與A172細(xì)胞后,實(shí)驗(yàn)組突變型MMP2 3’UTR區(qū)熒光素酶活性與空白對(duì)照組無明顯差異,但實(shí)驗(yàn)組野生型MMP2 3’UTR區(qū)熒光素酶活性較空白對(duì)照組明顯下降。(4)通過Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)與劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞侵襲遷移顯示,miR-34a可抑制腫瘤侵襲遷移,且可逆轉(zhuǎn)因MMP2增強(qiáng)的侵襲遷移能力使其下降。結(jié)論:(1)miR-34a的mRNA表達(dá)水平與MMP2的mRANA表達(dá)呈負(fù)相關(guān),MMP2可能為miR-34a下游靶基因。(2)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞株內(nèi)miR-34a可通過結(jié)合MMP2 3’UTR區(qū)的特定序列來下調(diào)MMP2的蛋白及mRNA表達(dá)水平。(3)腦膠質(zhì)瘤內(nèi)miR-34a為抑癌基因,其通過下調(diào)MMP2的表達(dá)來對(duì)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞的侵襲遷移產(chǎn)生抑制作用。
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R739.4
【圖文】：

采用 western blot 法檢測(cè) MMP2 蛋白在各株腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞株內(nèi)的表達(dá)情況，并以 HEB 細(xì)胞作為參照。結(jié)果顯示，MMP2 蛋白在各株腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞株內(nèi)呈高表達(dá)，其中以U87及A172的MMP2蛋白表達(dá)最為顯著，見圖3.1A。通過qRT-PCR技術(shù)檢測(cè) miR-34a 與 MMP2 mRNA 的表達(dá)水平，結(jié)果顯示 MMP2 的 mRNA 表達(dá)水平與其蛋白表達(dá)水平大致相同，對(duì)于 miR-34a 的 mRNA 則呈低表達(dá)水平，miR-34a 與 MMP2 的 mRNA 表達(dá)呈現(xiàn)出負(fù)相關(guān)的關(guān)系，見圖 3.1B�？梢酝茰y(cè)miR-34a 在腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞株內(nèi)的 mRNA 表達(dá)水平與 MMP2 呈負(fù)相關(guān)的關(guān)系，MMP2 可能為 miR-34a 的下游靶基因。A：各腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞株內(nèi) MMP2 蛋白的表達(dá)水平；B：各腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞株內(nèi) miR-34a 與 MMP2的 mRNA 表達(dá)水平圖 3.1：miR-34a 與 MMP2 在各種腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞株內(nèi)的表達(dá)情況3.2 下調(diào) miR-34a 對(duì) MMP2 蛋白及 mRNA 表達(dá)的影響篩選 MMP2 表達(dá)水平相對(duì)較高的 U87 與 A172 細(xì)胞以更好地觀察 MMP2 蛋白及 mRNA 表達(dá)變化情況。分別向 U87、A172 細(xì)胞轉(zhuǎn)染 miR-34a mimic 與抑制劑，采用qRT-PCR法明確miR-34a的mRNA高表達(dá)及產(chǎn)生抑制作用后（圖3.2A），然后再通過 qRT-PCR 法、western blot 法提取 MMP2 蛋白及 mRNA

miR-34a通過與MMP2mRNA3’UTR結(jié)合來下調(diào)MMP2的表達(dá)

miR-34a通過調(diào)控MMP2的表達(dá)對(duì)腦膠質(zhì)瘤侵襲遷移能力產(chǎn)生的影響……

【參考文獻(xiàn)】

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1 曾志青;劉洪;;巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子和基質(zhì)金屬蛋白酶2在膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)及其臨床意義[J];實(shí)用心腦肺血管病雜志;2014年07期

2 陳磊峰;劉天德;杜曉紅;胡俊文;黃子曦;邵江華;;原發(fā)性肝癌細(xì)胞中Rock2調(diào)控MMP2對(duì)其侵襲遷移的作用[J];腫瘤防治研究;2014年01期

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4 王萍;馬騰;劉云會(huì);趙麗妮;馬s

本文編號(hào)：2805640