【摘要】：背景膠質瘤是成人腦部最常見的原發(fā)腫瘤,平均每年每10萬中約為4-5人發(fā)病,并且其死亡率顯著高于其他腦腫瘤。盡管在過去的幾十年間,神經外科手術治療與放射治療的發(fā)展取得了長足的發(fā)展,但作為中樞神經系統(tǒng)最為常見的原發(fā)性腫瘤,膠質瘤的中位生存時間也僅僅在15個月左右。因此,研究膠質瘤發(fā)生發(fā)展的機制,并為尋找新的治療膠質瘤的靶點提供理論基礎,就顯得尤為重要。TRIM29(tripartite motif-29),也被稱作ATDC,屬于TRIM蛋白家族的一員,該家族由70多名成員組成。TRIM蛋白家族以擁有一系列保守的結構域結構為特征,其中包括B-box1型(B1),B-box2型(B2)和RING指和卷曲螺旋(RBCC)結構域基元。目前研究顯示,TRIM家族參與調節(jié)了多種生物學進程,例如細胞發(fā)育、分化、凋亡及腫瘤發(fā)生等。TRIM29(ATDC)基因位于染色體11q23位置,其最初被認為是遺傳病共濟失調毛細血管擴張中的異位基因,并發(fā)現其可以增加細胞的輻射抗性。據報道顯示,TRIM29在多種腫瘤中發(fā)揮著重要的作用,其與腫瘤細胞的增殖、遷移以及成瘤能力等密切相關,但目前在膠質瘤中還未見到明確報道及研究。目的本研究旨在探究TRIM29在膠質瘤中的表達與患者臨床特征的相關性、以及TRIM29對膠質瘤細胞增殖、遷移和成瘤性的影響,并對其內在機制進行初步探索。方法1.通過免疫組織化學法檢測56例膠質瘤組織和正常腦組織中的TRIM29蛋白表達,并分析膠質瘤組織中TRIM29蛋白的表達與臨床病理特征間的關系。通過Western blot法在膠質瘤常見細胞株(A172、LN-229、U-87 MG、U-118MG)中檢測TRIM29蛋白的表達譜。2.利用RNA干擾技術獲得穩(wěn)定敲低的shTRIM29組細胞。并通過Transwell、MTT、BrdU及軟瓊脂克隆形成實驗,檢測TRIM29對膠質瘤細胞遷移、增殖能力的影響。3.通過裸鼠皮下成瘤模型的構建,檢測TRIM29在體內對膠質瘤細胞增殖、成瘤能力的影響。4.采用Western blot法檢測TRIM29對AKT信號通路相關蛋白的影響,探究TRIM29調節(jié)膠質瘤增殖、成瘤、遷移能力的內在機制。結果1.免疫組化結果顯示,TRIM29蛋白表達在膠質瘤組織中多以強陽性表達為主,而在正常腦組織中則多為陰性或弱陽性表達為主。此外,通過相關性分析發(fā)現,TRIM29在膠質瘤中的表達與腫瘤WHO分級呈正相關(r=0.535,P0.05);與年齡、性別等無明顯相關性(P0.05)。Western blot法檢測顯示,TRIM29在膠質瘤常見細胞株A172、LN-229、U-87 MG、U-118MG中均有表達,且在惡性程度較高的U-87 MG細胞株中的表達量明顯高于其他細胞株,故選取該細胞株進行后續(xù)實驗。2.RNA干擾處理后,得到TRIM29穩(wěn)定敲低的shTRIM29組的U-87 MG細胞。Transwell、MTT、BrdU及軟瓊脂克隆形成實驗結果顯示,敲低TRIM29可明顯抑制膠質瘤細胞的遷移能力,同時BrdU標記陰性細胞數量下降,細胞的克隆形成能力也明顯減弱,說明TRIM29在膠質瘤細胞增殖、遷移中發(fā)揮重要作用。3.裸鼠體內成瘤實驗結果提示,敲低TRIM29后腫瘤的生長速度減慢,體積降低,同時Ki67的表達量也明顯降低。4.通過Western blot檢測發(fā)現,TRIM29的敲低可引起AKT的活化形式p-AKT表達的降低。結論1.TRIM29在膠質瘤組織中表達上升,與膠質瘤的WHO分期呈正相關,同時TRIM29在膠質瘤細胞株中均有表達,且在惡性程度較高的U-87MG細胞中表達明顯升高,提示TRIM29的高表達與膠質瘤的惡性程度密切相關。2.下調TRIM29的蛋白表達可抑制膠質瘤細胞的增殖、遷移能力。3.下調TRIM29的表達,可在體內抑制膠質瘤細胞的增殖、成瘤能力,說明TRIM29是影響膠質瘤發(fā)展的關鍵因素。4.TRIM29可能通過AKT信號通路,對膠質瘤細胞的增殖、成瘤、遷移進行調控。
【學位授予單位】：中國人民解放軍陸軍軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R739.4
【圖文】：

A:TRIM29 在正常腦組織中陰性表達；B:TRIM29 在膠質瘤細胞中陽性表達圖 2.3.1 TRIM29 在正常腦組織和膠質瘤組織中的表達.2 膠質瘤組織中 TRIM29 蛋白的表達與臨床特征的關系。對膠質瘤患者TRIM29的表達與臨床病理特征的關系進行Spearman 相關，TRIM29 的表達與膠質瘤 WHO 分級呈正相關（r=0.535,P＜0.05），具29 表達越高，膠質瘤的惡性程度越高，但與患者年齡、性別無明顯相關表 2.3.1 TRIM29 在 56 例膠質瘤標本中的表達及臨床病理參數理特征 例數 TRIM29 表達量 P*值低表達 高表達齡 0.0640 歲 36 14 22

圖 2.3.2 膠質瘤細胞株中 TRIM29 的蛋白表達.0 統(tǒng)計軟件進行數據分析；兩組間比較采用 t 檢。檢驗水準：α=0.05。經外科最為常見的惡性腫瘤，其發(fā)病率和致死率、放療、化療等治療手段都取得了飛速的進步，僅在 15 個月左右，因此，尋找新的治療方法便顯生發(fā)展的機制研究越發(fā)受到重視，在內在機制上醫(yī)療發(fā)展的重點和熱點。尋找影響膠質瘤發(fā)展進

陸軍軍醫(yī)大學碩士學位論文3.3 實驗結果3.3.1 通過 RNA 干涉膠質瘤細胞 U-87 MG 中 TRIM29 的表達情況檢測通過慢病毒 RNA 干擾技術，我們對人膠質瘤細胞 U-87 MG 中的 TRIM2敲低，結果得到穩(wěn)定敲低 TRIM29 的 shTRIM29（實驗組）U -87 MG 細胞shScramble 組（對照組）作為實驗對照細胞。通過對兩組 U-87 MG 細胞進行測，結果顯示，shTRIM29(實驗組)細胞中 TRIM29 蛋白的表達水平明顯低于組（對照組）細胞，說明膠質瘤細胞 TRIM29 已成功敲低，可用作后續(xù)實驗。（

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本文編號：2797142