【摘要】：目的:許多研究表明人巨細胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)與膠質(zhì)瘤的惡性發(fā)展密切相關(guān),如影響細胞周期、抑制細胞凋亡、促進血管生成和幫助細胞免疫逃避等。近年來研究顯示參與DNA拓撲空間結(jié)構(gòu)相互轉(zhuǎn)換的核酶拓撲異構(gòu)酶2A(TOP2A)在許多惡性腫瘤中高表達,有望成為腫瘤預(yù)后的新型分子標志物。但尚未見關(guān)于HCMV感染與TOP2A表達的相關(guān)研究。本研究通過檢測IE1和TOP2A在膠質(zhì)瘤中的表達,研究膠質(zhì)瘤HCMV感染與TOP2A表達的關(guān)系。方法:在Oncomine數(shù)據(jù)庫平臺,利用其在線分析工具薈萃分析了6個不同數(shù)據(jù)集中膠質(zhì)瘤樣本與正常組織對照樣本中TOP2A的表達水平。PrognoScan數(shù)據(jù)庫分析GSE4271 77例膠質(zhì)瘤樣本和GSE4412 74例膠質(zhì)瘤樣本,預(yù)測TOP2A的表達情況與膠質(zhì)瘤生存預(yù)后的關(guān)系。收集并分析膠質(zhì)瘤組織石蠟標本58例。采用免疫組織化學(xué)方法檢測樣本中TOP2A蛋白和HCMV IE1蛋白的表達情況,并分析HCMV感染和TOP2A表達的相關(guān)性。以HCMV感染人膠質(zhì)瘤U87細胞為實驗組,未感染HCMV U87細胞對照組、HCMV+800μmol/L更昔洛韋(GCV)陰性對照組。應(yīng)用蛋白質(zhì)印跡法(Western Blot)的方法檢測IE1和TOP2A蛋白的表達。取HCMV感染后的U87細胞為實驗組,未感染HCMV的U87對照組,異種移植兩組細胞于B-NSG重度免疫缺陷鼠,每組4只。成瘤后采用免疫組化檢測IE1和TOP2A蛋白的表達。結(jié)果:在Oncomine數(shù)據(jù)庫平臺薈萃分析853例膠質(zhì)瘤樣本和52例正常腦組織樣本顯示,TOP2A在膠質(zhì)瘤組中明顯高表達(P=3.14í10~(-6),中位數(shù)=126)。PrognoScan數(shù)據(jù)庫平臺分析GSE4271 77例膠質(zhì)瘤樣本示:TOP2A高表達與膠質(zhì)瘤死亡事件負相關(guān)[P=0.002735,HR=1.41(1.13-1.76)]。分析GSE4412 74例膠質(zhì)瘤樣本示TOP2A高表達與膠質(zhì)瘤死亡事件負相關(guān)[P=0.009506,HR=1.37(1.08-1.73)]。膠質(zhì)瘤石蠟樣本免疫組化結(jié)果顯示:與瘤旁免疫組織對比,膠質(zhì)瘤中TOP2A明顯高表達(P0.0001,t=4.578);TOP2A的表達情況與患者的腫瘤分級相關(guān)(P0.0001,F=11.91)。在所有膠質(zhì)瘤樣本中,IE1陽性率(56/58,98%),IE1低表達組(28/58,48%),IE1高表達(30/58,62%)。IE1低表達組與IE1高表達組對照顯示:TOP2A在IE1高表達組明顯高表達(P0.0001,t=4.479)。Western blot結(jié)果均表明:與未感染HCMV和HCMV感染+800μmol/L GCV雙陰性對照組相比,MOI=2感染U87細胞48h后TOP2A蛋白明顯高表達(P=0.0068,t=4.436)。腫瘤異種移植實驗顯示:HCMV感染組U87細胞成瘤速度快于HCMV陰性組U87細胞(P0.0001,t=2.430)。成瘤31天后,HCMV感染組瘤體重量高于HCMV陰性組(P=0.0133,t=5.265)。瘤體組織免疫組化顯示:在HCMV感染組中TOP2A明顯高于HCMV陰性組(P0.0001,t=5.447)。結(jié)論:與正常腦組織相比,膠質(zhì)瘤組織中TOP2A高表達,并可能與膠質(zhì)瘤的腫瘤生存預(yù)后有關(guān)。HCMV感染膠質(zhì)瘤后能促進TOP2A高表達,進而促進膠質(zhì)瘤惡性進展。
【圖文】：

（P=2.59 10-13，t=30.6，圖3.1b）。另外在Sun L等人的數(shù)據(jù)芯片中顯示TOP2A的表達高于正常腦組織 102.5 倍（P=2.37 10-27，t=18.62，圖 3.1c）。Table 3.1 在 Oncomine 數(shù)據(jù)庫平臺 meta 分析 6 個不同數(shù)據(jù)集 TOP2A 基因的表達情況數(shù)據(jù)集 (樣本總數(shù)) 膠質(zhì)瘤與正常對照（樣本數(shù)） 差異倍數(shù) P 值高表達基因Gene RankSun Brain(150)膠質(zhì)母細胞瘤 81 vs. 正常對照 23 102.54 2.37 10-2722 (in top1%)少突膠質(zhì)細胞 50 vs. 正常對照 23 28.44 8.4 10-1827 (in top1%)間變性星形細胞瘤19 vs正常對照23 34.64 4.10 10-1238 (in top1%)Liang Brain (33) 膠質(zhì)母細胞瘤 31 vs 正常對照 2 2.20 6.27 10-6115 (in top2%)TCGA Brain (552) 膠質(zhì)母細胞瘤 542 vs 正常對照 10 28.90 2.59 10-13137 (in top2%)French Brain (29) 間變性少突膠質(zhì)瘤 23 vs 正常對照 6 9.68 1.15 10-8145 (in top1%)Shai Brain (34) 膠質(zhì)母細胞瘤 27 vs 腦白質(zhì) 7 2.29 1.17 10-6227 (in top3%)Murat Brain (84) 膠質(zhì)母細胞瘤 80 vs. 正常對照 4 13.76 2

PrognoScan數(shù)據(jù)庫平臺生成膠質(zhì)瘤病人TOP2AmRNAKaplanMeier生存曲線
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R739.41

【參考文獻】

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1 宋靜宜;錢冬萌;王斌;黃睿;胡明;華曉敏;朱秀麗;陳豪;宋旭霞;;HCMV感染對膠質(zhì)瘤細胞U87自噬的影響[J];微生物學(xué)雜志;2015年01期

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本文編號：2624047