【摘要】：研究目的:毛囊神經(jīng)嵴干細(xì)胞(hair follicle neural crest stem cells,hfNCSCs)位于皮膚毛囊的隆突部,屬于神經(jīng)嵴來源的干細(xì)胞。由于大部分個體的毛囊分布廣泛,所以該細(xì)胞的組織來源相對豐富。并且毛囊神經(jīng)嵴部相對而言易于取材和分離,可以進行大量的、充分的細(xì)胞培養(yǎng)。更重要的是,毛囊神經(jīng)嵴干細(xì)胞和其他成體干細(xì)胞相比在體內(nèi)成瘤率較低。毛囊神經(jīng)嵴干細(xì)胞在不同誘導(dǎo)因子的刺激下,可向不同類型的細(xì)胞分化。例如:已有研究將該細(xì)胞誘導(dǎo)為神經(jīng)元細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞等,這些誘導(dǎo)而來的細(xì)胞不僅表型發(fā)生了改變,同時細(xì)胞功能也隨之發(fā)生了改變。將這些誘導(dǎo)而來的細(xì)胞移植到動物體內(nèi)也可發(fā)揮相應(yīng)的作用。毛囊神經(jīng)嵴干細(xì)胞的這些特性在細(xì)胞治療、組織工程、藥物研發(fā)中成為理想的細(xì)胞來源,所以對毛囊干細(xì)胞進行深入的生物特性方面的研究具有重要的意義。在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中數(shù)量最多的細(xì)胞為膠質(zhì)細(xì)胞,其中星形膠質(zhì)細(xì)胞又占有絕大部分,其在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中發(fā)揮著重要作用。星形膠質(zhì)細(xì)胞功能障礙可導(dǎo)致許多神經(jīng)系統(tǒng)方面的疾病。而人們對星形膠質(zhì)細(xì)胞功能的認(rèn)識大多是通過體外實驗獲得的,因此,星型膠質(zhì)細(xì)胞的體外培養(yǎng)在研究中起著至關(guān)重要的作用。而原代方法獲得的星形膠質(zhì)細(xì)胞較易被其他細(xì)胞污染,這可能對星形膠質(zhì)細(xì)胞的研究工作產(chǎn)生影響。所以本實驗?zāi)康氖翘崛〈笫蟮膆fNCSCs,對提取的細(xì)胞進行培養(yǎng)和鑒定后,使用特定的誘導(dǎo)培養(yǎng)基誘導(dǎo)其向星形膠質(zhì)細(xì)胞分化,并對誘導(dǎo)而來的星形膠質(zhì)細(xì)胞進行體外功能方面的鑒定。研究方法:(1)采用組織貼塊培養(yǎng)法對提取的毛囊神經(jīng)嵴干細(xì)胞進行培養(yǎng),之后對培養(yǎng)的細(xì)胞進行免疫熒光鑒定。(2)對提取并培養(yǎng)的毛囊神經(jīng)嵴干細(xì)胞進行誘導(dǎo),使其向星形膠質(zhì)細(xì)胞分化,并對分化后的細(xì)胞進行免疫熒光染色鑒定。(3)對誘導(dǎo)來的星形膠質(zhì)細(xì)胞進行體外功能方面的檢測:對誘導(dǎo)來的星形膠質(zhì)細(xì)胞在促進神經(jīng)元增殖及突觸形成方面的功能進行檢測。結(jié)果:(1)對大鼠的毛囊神經(jīng)嵴進行提取并培養(yǎng)出的細(xì)胞,其活性較好、形態(tài)規(guī)則、增殖良好,nestin免疫熒光染色為陽性。(2)對hfNCSCs培養(yǎng)后進行誘導(dǎo)分化,分化后的細(xì)胞GFAP免疫熒光染色為陽性,證實其為星形膠質(zhì)細(xì)胞。(3)誘導(dǎo)而來的星形膠質(zhì)細(xì)胞可以促進神經(jīng)元細(xì)胞增殖,并可促進運動神經(jīng)元的突觸形成。結(jié)論:(1)組織貼塊法提取的毛囊神經(jīng)嵴可以培養(yǎng)出毛囊神經(jīng)嵴干細(xì)胞。(2)在特定的誘導(dǎo)條件下可誘導(dǎo)毛囊神經(jīng)嵴干細(xì)胞向星形膠質(zhì)細(xì)胞分化。(3)誘導(dǎo)來的星形膠質(zhì)細(xì)胞可以存活、增殖并存在著相應(yīng)的功能。
【圖文】：

毛囊隆突部組織貼塊培養(yǎng)４ｄ后可見有少許梭形細(xì)胞開始在隆突部爬出，逡逑呈放射狀增長。７ｄ觀察，細(xì)胞進一步增加，排列緊密。傳代后可見細(xì)胞周圍逡逑光暈較強，胞核折光性較高，形態(tài)大多為長梭形，有小部分為多角形（圖３－１邋）。逡逑ＥＭＭ—ＳＢ泛漏逡逑▲邋＾逡逑參？邋▲邐▲逡逑圖３－１毛囊神經(jīng)嵴培養(yǎng)結(jié)果（２０Ｍｍ）逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋３－１邋Ｈａｉｒ邋ｆｏｌｌｉｃｌｅ邋ｎｅｕｒａｌ邋ｃｒｅｓｔ邋ｃｕｌｔｕｒｅ邋ｒｅｓｕｌｔｓ邋（２０邋ｆｘｍ）逡逑ａ為培養(yǎng)四天，毛囊神經(jīng)嵴干細(xì)胞開始爬出；ｂ為培養(yǎng)７ｄ后，毛囊神經(jīng)嵴干細(xì)胞；逡逑ｃ、ｄ為培養(yǎng)１４ｄ后高倍鏡下的毛囊神經(jīng)嵴干細(xì)胞，可見細(xì)胞形態(tài)多為長梭形；ｅ為傳代逡逑后的毛囊神經(jīng)嵴干細(xì)胞。逡逑３＿１．２ｈｍＣＳＣｓ邋的鑒定逡逑對培養(yǎng)的ｈｆＮＣＳＣｓ進行Ｎｅｓｔｉｎ免疫熒光細(xì)胞化學(xué)染色法檢測，結(jié)果顯逡逑示大鼠ｈｆＮＣＳＣｓ的Ｎｅｓｔｉｎ染色為陽性（圖３－２）。逡逑２０逡逑

在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)并拍照。培養(yǎng)至第４天，細(xì)胞伸長以梭形逡逑或多角形細(xì)胞為主，并有的體積較大。培養(yǎng)１４天后，細(xì)胞形態(tài)逐漸變得較逡逑單一，呈梭形或星形，胞質(zhì)豐富，核大，境界清楚，折光度好（圖３－３）。逡逑２１逡逑
【學(xué)位授予單位】：濱州醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R741

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本文編號：2621229