【摘要】：背景:神經(jīng)退行性疾病是一種大腦和脊髓細(xì)胞神經(jīng)元結(jié)構(gòu)和功能喪失的疾病狀態(tài),影響人的記憶功能和運動功能,其病因和發(fā)病機(jī)制尚不明確。神經(jīng)元不可再生,一旦損害不可恢復(fù)~([1])。目前臨床上對神經(jīng)退行性疾病的治療僅是通過少數(shù)幾種藥物延緩其發(fā)病的病程,治療其緩解癥狀~([2])。神經(jīng)干細(xì)胞(Neural Stem Cells,NSCs)可自我更新且具有分化成神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細(xì)胞和少突膠質(zhì)細(xì)胞的能力~([3])。鑒于神經(jīng)退行性疾病由于神經(jīng)元不可逆的損害,神經(jīng)干細(xì)胞治療成為該疾病近幾年來備受關(guān)注的治療手段,但臨床上獲得大量的神經(jīng)干細(xì)胞是比較困難的。間充質(zhì)干細(xì)胞(Mesenchymal Stem Cells,MSCs)作為種子細(xì)胞的來源已成為國內(nèi)外學(xué)者探討的熱點,胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞(Human Placenta Derived Mesenchymal Stem Cells,hPDMSCs)來源豐富,采集方便,免疫原性極低,且具備多種分化潛能,有資料顯示,胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞有神經(jīng)分化的能力,但其分化成的神經(jīng)細(xì)胞具有有限的再生能力,對其是否可以誘導(dǎo)分化為神經(jīng)干細(xì)胞尚不清楚。目的:通過對人胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)、鑒定,研究其向神經(jīng)干細(xì)胞的分化情況,為臨床干細(xì)胞治療神經(jīng)退行性疾病提供理論依據(jù)。方法:從北京市海淀區(qū)婦幼保健院選擇足月剖宮產(chǎn)孕婦的胎盤,通過對胎盤機(jī)械分離及酶消化的方法分離得到胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞,用含10%FBS的培養(yǎng)基進(jìn)行細(xì)胞貼壁培養(yǎng)、傳代及凍存,應(yīng)用流式細(xì)胞技術(shù)檢測胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞表面特異標(biāo)志物的表達(dá),經(jīng)過成骨、成軟骨及成脂誘導(dǎo)培養(yǎng)基的誘導(dǎo)培養(yǎng)21天后,用茜素紅、甲苯胺藍(lán)、油紅O進(jìn)行細(xì)胞染色,觀察胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞的分化潛能。將用神經(jīng)營養(yǎng)因子bFGF、EGF添加N2和B27分三步將胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞分化為神經(jīng)干細(xì)胞,待細(xì)胞長滿后用0.0125%的胰蛋白酶進(jìn)行消化,并對分化得到的神經(jīng)干細(xì)胞進(jìn)行免疫熒光檢測,檢測神經(jīng)干細(xì)胞表面標(biāo)志物的表達(dá)情況。結(jié)果:體外分離培養(yǎng)人胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞形態(tài)類似成纖維細(xì)胞,呈梭形貼壁漩渦狀生長,流式細(xì)胞術(shù)檢測發(fā)現(xiàn)細(xì)胞高表達(dá)CD90、CD73C、CD105以及CD146,而CD34、CD31、CD45RA以及HLA-DR表達(dá)均為陰性。胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)21天后,經(jīng)過茜素紅染色后細(xì)胞出現(xiàn)著色為紅色的鈣結(jié)節(jié),經(jīng)甲苯胺藍(lán)染色后細(xì)胞染成藍(lán)色,經(jīng)油紅O染色后細(xì)胞出現(xiàn)紅色的圓形脂滴。經(jīng)神經(jīng)誘導(dǎo)后,細(xì)胞胞體縮小,折光性變強(qiáng)。由成纖維狀細(xì)胞變?yōu)榇笮〔坏鹊那蛐渭?xì)胞生長,經(jīng)免疫熒光檢測,由胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞不表達(dá)SOX1、PAX6和Nestin,而分化成的神經(jīng)細(xì)胞干細(xì)胞高度表達(dá)SOX1,PAX6和Nestin。結(jié)論:本實驗通過機(jī)械法和酶消化的方法成功的分離出了胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞,胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞的生物學(xué)特性與其他來源的間充質(zhì)干細(xì)胞的相似,并具有向成骨、成軟骨及成脂細(xì)胞的分化潛能;經(jīng)神經(jīng)營養(yǎng)因子誘導(dǎo)后可成功得到神經(jīng)干細(xì)胞,為臨床上得到大量的神經(jīng)干細(xì)胞治療神經(jīng)退行性疾病提供了理論基礎(chǔ)。
【圖文】：

胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞第三代培養(yǎng)Fig.1Thirdgenerationhumanplacentalmesenchymalstemcells（Thecells

胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞的流式結(jié)果
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R741

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2593637