【摘要】：目的：康復(fù)訓(xùn)練是是目前缺血性腦卒中恢復(fù)期促進神經(jīng)功能恢復(fù)的有效治療措施之一。研究證實缺血性腦卒中后給予針對性的功能訓(xùn)練和活動有利于缺損神經(jīng)功能的恢復(fù)，提高患者的日常生活質(zhì)量[1-3]。同時cAMP-PKA-pCREB信號通路的激活可明顯促進損傷軸突再生[4-6]，改善CNS損傷后的神經(jīng)功能障礙。因此，為求進一步探索康復(fù)訓(xùn)練促進缺血性卒中后的神經(jīng)功能恢復(fù)機制是否與cAMP-PKA-pCREB信號通路的激活促進損傷軸突再生有關(guān)，我們擬以cAMP-PKA-pCREB這條信號通路為切入點，通過觀察康復(fù)訓(xùn)練對腦梗死后大鼠腦組織內(nèi)cAMP、總PKA含量以及PKAc、pCREB蛋白表達變化的影響，結(jié)合軸突再生標(biāo)志物GAP-43蛋白表達變化的檢測和平衡木試驗對實驗性大鼠運動功能的評價，闡述cAMP-PKA-pCREB信號通路在康復(fù)訓(xùn)練促進腦梗死后大鼠的運動功能恢復(fù)過程中的具體作用，，為臨床康復(fù)治療提供新的理論支持。 方法：采用成年健康的SD雄性大鼠，參照Longa改良線栓法進行大腦中動脈缺血灌注（MACO）模型的制備，缺血2h后再灌注。模型成功的大鼠隨機分為自然恢復(fù)組、自然恢復(fù)+Rp-cAMP組、康復(fù)訓(xùn)練組和康復(fù)訓(xùn)練+Rp-cAMP組，PKA抑制劑Rp-cAMP于側(cè)腦室注射后立即進行MACO模型的制備。同時設(shè)立假手術(shù)組。康復(fù)訓(xùn)練的實驗性大鼠均于術(shù)后48h開始訓(xùn)練。時間點設(shè)立為術(shù)后2d、7d、14d和21d。通過酶聯(lián)免疫法檢測腦組織內(nèi)cAMP、總PKA的含量變化，Western Blot檢測腦組織內(nèi)PKAc、pCREB蛋白的表達變化，同時采用免疫組化法進行pCREB、PKAc、GAP-43蛋白表達的定位檢測及GAP-43蛋白表達的半定量分析，應(yīng)用平衡木試驗對實驗性大鼠進行運動功能評價。 結(jié)果：（1）運動功能評分結(jié)果：自然恢復(fù)組大鼠的平衡木試驗評分低于自然恢復(fù)+Rp-cAMP組；康復(fù)訓(xùn)練組大鼠明顯低于自然恢復(fù)組，也低于康復(fù)訓(xùn)練+Rp-cAMP組；（2）腦組織內(nèi)cAMP、總PKA的含量和PKAc、pCREB蛋白表達的結(jié)果:自然恢復(fù)組大鼠高于自然恢復(fù)+Rp-cAMP組，康復(fù)訓(xùn)練組大鼠明顯高于自然恢復(fù)組，也高于康復(fù)訓(xùn)練+Rp-cAMP組；（3）腦組織GAP-43蛋白表達結(jié)果：自然恢復(fù)組大鼠高于自然恢復(fù)+Rp-cAMP組，康復(fù)訓(xùn)練組大鼠明顯高于自然恢復(fù)組，也高于康復(fù)訓(xùn)練+Rp-cAMP組。以上改變均于術(shù)后14d最為明顯。 結(jié)論：（1）腦組織缺血后腦組織內(nèi)cAMP、總PKA的含量增加，PKAc及其下游pCREB蛋白的表達也增強，同時GAP-43蛋白表達也隨之明顯增加。（2）康復(fù)訓(xùn)練可明顯增加腦組織cAMP、總PKA的含量，促進PKAc、pCREB蛋白的表達，同時GAP-43蛋白的表達也隨之明顯增加。（3）側(cè)腦室注射Rp-cAMP可可明顯抑制MACO大鼠腦組織內(nèi)總PKA、PKAc和pCREB蛋白的表達，并明顯的拮抗了康復(fù)訓(xùn)練對以上指標(biāo)的促進作用。（4）康復(fù)訓(xùn)練可明顯改善MACO大鼠的運動功能。（5）側(cè)腦室注射Rp-cAMP可明顯減弱康復(fù)訓(xùn)練對運動功能的改善作用。這些研究發(fā)現(xiàn)提示，cAMP-PKA-pCREB信號通路的激活促進損傷軸突再生參與了腦缺血后的神經(jīng)功能的自然恢復(fù)，同時也是康復(fù)治療促進腦缺血后大鼠神經(jīng)功能恢復(fù)的可能機制之一。
【圖文】：

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文21圖1 各組大鼠不同時間點的運動功能評分比較Fig.1 Comparision of the scores of motor function test in each group at different time points.2 指標(biāo)檢測結(jié)果2.1 實驗性大鼠腦組織 cAMP、總 PKA 的含量變化不同時間點各組大鼠腦組織內(nèi)cAMP含量的結(jié)果見表2、圖2，總PKA含量的結(jié)果見表3、圖3。康復(fù)訓(xùn)練組的大鼠腦組織內(nèi)cAMP、總PKA含量明顯高于自然恢復(fù)組，結(jié)合大鼠的運動功能評分結(jié)果，提示康復(fù)訓(xùn)練促進腦缺血后大鼠的運動功能恢復(fù)與腦組織內(nèi)cAMP、總PKA含量的增加有關(guān)；側(cè)腦室給予PKA抑制劑Rp-cAMP后，自然恢復(fù)組的大鼠腦組織內(nèi)總PKA含量的表達明顯減少，同時也抑制了康復(fù)訓(xùn)練對腦缺血后腦組織內(nèi)總PKA含量的促進作用，結(jié)合運動功能評價結(jié)果提示cAMP-PKA信號通路參與了康復(fù)訓(xùn)練促進腦缺血后大鼠運動功能的恢復(fù)過程。

▲P＜0.05圖2 各組大鼠不同時間點的腦組織內(nèi)cAMP含量的變化趨勢圖Fig.2 The concentration of cAMP in the rats at different time points.表3 各組大鼠不同時間點的腦組織內(nèi)總PKA含量變化注：與自然恢復(fù)組比較，* P＜0.05，與康復(fù)訓(xùn)練組比較，▲P＜0.05分組例 數(shù)（只）cAMP（nmol/100 mg）術(shù)后2 d 術(shù)后7 d 術(shù)后14 d 術(shù)后21 d假手術(shù)組 12 46.48±2.10 45.82±1.87 45
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R743.3

【參考文獻】

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1 牛陵川;李長清;陳艷;劉圣山;黃瑩;;雙丁酸環(huán)腺苷酸促進腦缺血再灌注大鼠軸突再生和運動功能恢復(fù)[J];中國老年學(xué)雜志;2009年07期

2 張燕虹;李長清;牛陵川;;康復(fù)訓(xùn)練對腦缺血大鼠運動功能恢復(fù)和腦組織cAMP-PKA信號通路的影響[J];中國實驗動物學(xué)報;2013年06期

本文編號：2551080