發(fā)布時(shí)間：2018-11-01 15:34

【摘要】：目的:缺血性腦卒中是對(duì)人類健康具有嚴(yán)重威脅的疾病之一,具有發(fā)病率、致殘率、復(fù)發(fā)率、死亡率均高的特點(diǎn),其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜,主要涉及:炎癥反應(yīng)、氧化性損傷、細(xì)胞的凋亡、Ca2+的超載及興奮性毒性機(jī)制等方面。本文通過(guò)ICR雄性小鼠建立短暫性腦缺血再灌注模型,術(shù)前予以抗帕金森病藥物美多芭干預(yù),于缺血再灌注后的24小時(shí)、72小時(shí)進(jìn)行神經(jīng)功能行為學(xué)評(píng)分,檢測(cè)小鼠缺血半球腦組織含水量、梗死體積的變化,測(cè)定紋狀體區(qū)神經(jīng)元數(shù)量的變化及小膠質(zhì)細(xì)胞的活化情況,測(cè)定炎癥相關(guān)因子、檢測(cè)氧化損傷相關(guān)酶及細(xì)胞凋亡通路PI3K/Akt的變化,以此來(lái)探究美多芭對(duì)小鼠短暫性腦缺血再灌注損傷的神經(jīng)保護(hù)作用及其作用的機(jī)制。方法:將成年的雄性ICR小鼠隨機(jī)的分為6組,每組6只,實(shí)驗(yàn)的小鼠依次分為:假手術(shù)組、美多芭+假手術(shù)組、手術(shù)1天組、美多芭+手術(shù)1天組、手術(shù)3天組、美多芭+手術(shù)3天組。應(yīng)用線栓法制作小鼠大腦中動(dòng)脈閉塞(MCAO)的模型。其中美多芭干預(yù)組術(shù)前三天同一時(shí)間予以美多芭灌胃,各組小鼠于術(shù)后24小時(shí)與72小時(shí)分別進(jìn)行神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分,梗死側(cè)腦含水量的測(cè)定,梗死體積的測(cè)定。免疫組化實(shí)驗(yàn)檢測(cè)NeuN標(biāo)記的神經(jīng)元核抗原與Iba1標(biāo)記的小膠質(zhì)細(xì)胞的變化,蛋白印跡法測(cè)定Iba-1、COX2、NF-kB、SOD1、SOD2、Akt、p-Akt的蛋白表達(dá)。結(jié)果:(1)假手術(shù)組及美多芭+假手術(shù)組小鼠沒(méi)有神經(jīng)功能缺損癥狀;應(yīng)用美多芭的MCAO手術(shù)組小鼠神經(jīng)功能評(píng)分均較單純MCAO手術(shù)的小鼠神經(jīng)功能評(píng)分降低,且差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義p0.05。(2)美多芭干預(yù)的手術(shù)1天組腦組織的含水量較單純手術(shù)1天組明顯降低,p0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;美多芭藥物干預(yù)的手術(shù)3天組腦組織含水量較單純手術(shù)3天組顯著降低,提示腦水腫減輕;而藥物干預(yù)的MCAO 1天組與3天組之間腦組織含水量變化不明顯。(3)MCAO手術(shù)3天組的腦梗死體積較MCAO手術(shù)1天組的增多;美多芭干預(yù)的手術(shù)1天組腦梗死體積較手術(shù)1天組減少;美多芭干預(yù)的手術(shù)3天組的腦梗死體積較單純手術(shù)3天組明顯降低。(4)免疫組化實(shí)驗(yàn):在假手術(shù)組經(jīng)NeuN染色的紋狀體部位的神經(jīng)元細(xì)胞形態(tài)規(guī)則,結(jié)構(gòu)完整;而MCAO手術(shù)組神經(jīng)元的數(shù)量明顯減少,細(xì)胞形態(tài)不規(guī)整;藥物干預(yù)的MCAO手術(shù)組神經(jīng)元的數(shù)量與對(duì)應(yīng)的MCAO手術(shù)組相比數(shù)量均增多,且細(xì)胞形態(tài)及排列相對(duì)完好,p0.05。Iba1染色的小膠質(zhì)細(xì)胞在假手術(shù)組中呈現(xiàn)分葉狀,小胞體;MCAO手術(shù)后小膠質(zhì)細(xì)胞活化為形態(tài)不規(guī)整的阿米巴樣,且手術(shù)3天組的更明顯;而美多芭干預(yù)的MCAO組小膠質(zhì)細(xì)胞的激活均受到明顯抑制。(5))蛋白印跡實(shí)驗(yàn):Iba1蛋白的表達(dá)在MCAO手術(shù)組均升高;但在藥物的干預(yù)下MCAO手術(shù)組的蛋白表達(dá)均下調(diào);另外手術(shù)3天組與手術(shù)1天組相比Iba1蛋白的表達(dá)要更多些。COX2及NF-kB的蛋白在各組小鼠基本一致,假手術(shù)組中表達(dá)均很低;MCAO手術(shù)組較假手術(shù)組都明顯升高p0.05,且隨著時(shí)間的推移手術(shù)3天組蛋白表達(dá)的要更多;而藥物干預(yù)的MCAO組蛋白的表達(dá)明顯降低,與各自對(duì)應(yīng)的手術(shù)組比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,p0.05。SOD1及SOD2的蛋白表達(dá)大體相同,手術(shù)組的蛋白表達(dá)較假手術(shù)組明顯降低p0.05;而增加了美多芭的MCAO組的蛋白表達(dá)比對(duì)應(yīng)的MCAO手術(shù)組明顯增多p0.05;且MCAO手術(shù)1天組蛋白表達(dá)明顯高于手術(shù)3天組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,p0.05。Akt的蛋白表達(dá)在手術(shù)組較假手術(shù)組雖有降低,但差異不明顯;美多芭干預(yù)的手術(shù)組的蛋白表達(dá)與單純手術(shù)組比,也沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。手術(shù)組p-Akt的蛋白表達(dá)較假手術(shù)組明顯減少p0.05;手術(shù)1天組的蛋白表達(dá)量較手術(shù)3天組相對(duì)較高p0.05;而對(duì)于加了美多芭干預(yù)的手術(shù)組來(lái)說(shuō)蛋白的表達(dá)量較對(duì)應(yīng)的手術(shù)組都明顯升高p0.05。結(jié)論:(1)美多芭能夠明顯降低ICR小鼠腦缺血再灌注損傷后的行為學(xué)評(píng)分并促進(jìn)其神經(jīng)功能的恢復(fù);減輕梗死側(cè)腦細(xì)胞的水腫;顯著降低缺血再灌注后腦梗死體積;維持梗死區(qū)域紋狀體部位神經(jīng)元的數(shù)量。(2)美多芭可以抑制缺血再灌注損傷后紋狀體部位小膠質(zhì)細(xì)胞的活化,減少Iba1、NF-kB及COX2蛋白的表達(dá)。(3)美多芭能夠上調(diào)超氧化物歧化酶的表達(dá),減少自由基的產(chǎn)生。(4)美多芭可以激活PI3k/Akt通路,抑制細(xì)胞凋亡。本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果表明:美多芭除了具有良好的抗帕金森病的作用,同時(shí)還能對(duì)腦梗死起到保護(hù)作用,這一發(fā)現(xiàn)為缺血性腦損傷后繼發(fā)帕金森病起到了一定的預(yù)防作用,更為缺血性腦血管病溶栓后的腦保護(hù)治療提供了新的治療手段。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：揚(yáng)州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R743.3

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2304350