本文選題：嗅鞘細胞 + 原代培養(yǎng)　； 參考：《寧夏醫(yī)科大學(xué)》2014年碩士論文

【摘要】：目的1、采用改良差速貼壁聯(lián)合胰酶限時消化的方法培養(yǎng)大鼠乳鼠的嗅鞘細胞，并對細胞分泌的神經(jīng)生長因子進行檢測。2、將原代培養(yǎng)的嗅鞘細胞與異種神經(jīng)支架在體外共同培養(yǎng)，觀察在體外環(huán)境下支架對細胞的生長是否有影響。 方法實驗一：取10只SD大鼠的乳鼠（鼠齡7d），取乳鼠的嗅球，應(yīng)用改良差速貼壁聯(lián)合胰酶限時消化3min的方法培養(yǎng)細胞；對細胞進行神經(jīng)生長因子的檢測，細胞密度調(diào)整到密度1×106/ml，接種到24孔板內(nèi)，每組密度又分為3d組、5d組、7d組、9d組，神經(jīng)生長因子酶聯(lián)反應(yīng)檢測不同時間點細胞在分泌生長因子量上的差異。實驗二：萃取異種神經(jīng)（青紫藍兔脛神經(jīng)）支架，對萃取后神經(jīng)進行HE染色、S-100、Laminin免疫組織化學(xué)染色；在體外將嗅鞘細胞與異種神經(jīng)支架進行共培養(yǎng)，通過掃描電鏡觀察細胞與支架的共存情況；神經(jīng)生長因子酶聯(lián)反應(yīng)檢測單純嗅鞘細胞（對照組）、嗅鞘細胞與支架共培養(yǎng)（實驗組）在3d、5d、7d、9d不同時間點上神經(jīng)生長因子分泌上是否存在差異。 結(jié)果實驗一：應(yīng)用改良差速貼壁聯(lián)合胰酶限時消化3min的方法能夠培養(yǎng)出的較高濃度的嗅鞘細胞，細胞純度能夠達到70%；統(tǒng)計分析數(shù)據(jù)經(jīng)胰酶限時消化3min后的嗅鞘細胞分泌的神經(jīng)生長因子含量隨時間的延長而逐漸減少。胰酶消化后第3d神經(jīng)生長因子分泌的含量最高（P=0.012P＜0.05）。實驗二：萃取后的異種神經(jīng)支架鏡下未見雪旺氏細胞和髓鞘結(jié)構(gòu)，神經(jīng)基底膜、內(nèi)膜、束膜和外膜均存在；嗅鞘細胞能夠貼附生長在異種神經(jīng)支架上；實驗組與對照組在3d、5d、7d、9d四個不同時間點神經(jīng)生長因子的分泌量上的差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05） 結(jié)論1、聯(lián)合培養(yǎng)嗅鞘細胞的方法能獲得更高濃度的嗅鞘細胞，細胞濃度能夠達到70%，能夠滿足后期移植對細胞的要求。2、聯(lián)合培養(yǎng)的嗅鞘細胞在細胞生長到大約10d（胰酶限時消化后3d）的時候分泌的神經(jīng)生長因子量最多。3、萃取后的異種神經(jīng)支架能夠滿足作為載體支架的要求。4、原代培養(yǎng)的嗅鞘細胞能夠抓附在神經(jīng)支架上生長。5、嗅鞘細胞與支架共同培養(yǎng)后在神經(jīng)生長因子分泌量上沒有受到影響，細胞能夠正常分泌生長因子，異種神經(jīng)支架不干擾細胞的正常生長。
[Abstract]:Objective 1. To culture olfactory ensheathing cells of neonatal rats by modified differential adherent method combined with trypsin restriction digestion, and to detect nerve growth factor (NGF) secreted by the cells. The primary cultured olfactory ensheathing cells were co-cultured with xenogeneic nerve scaffolds in vitro. To observe the effect of scaffold on cell growth in vitro. Methods: 10 SD rats (7 days old, olfactory bulb) were taken from 10 SD rats, the cells were cultured by modified differential adherent method combined with trypsin time limit digestion, and the nerve growth factor (NGF) was detected. The cell density was adjusted to 1 脳 106 / ml and inoculated into 24 hole plate. Each group was divided into 3 d group, 5 d group, 7 d group and 9 d group. Experiment 2: extraction of xenogeneic nerve (blue rabbit tibial nerve) scaffold, HE staining of nerve after extraction, S-100 laminin immunohistochemical staining, co-culture of olfactory ensheathing cells and xenogeneic nerve scaffold in vitro, The coexistence of cell and scaffold was observed by scanning electron microscope. Nerve growth factor enzyme-linked reaction was used to detect whether there were differences in the secretion of nerve growth factor (NGF) at different time points (control group, olfactory ensheathing cell and scaffold culture) at different time points (3 d ~ 5 d ~ 7 d ~ 9 d). Results in experiment 1, a high concentration of olfactory ensheathing cells could be cultured by using the modified differential adherent method combined with trypsin to digest 3min. The content of NGF secreted by olfactory ensheathing cells after digesting 3min by trypsin was gradually decreased with the increase of time. On the 3rd day after trypsin digestion, the content of nerve growth factor (NGF) was the highest (P < 0.05). Experiment 2: there were no Schwann cells and myelin sheath structure, nerve basement membrane, intima, bundle membrane and adventitia, olfactory ensheathing cells could be attached to the xenogeneic nerve scaffold under the extraction, and the olfactory ensheathing cells could grow on the xenogeneic nerve scaffold. There was no significant difference in the secretion of nerve growth factor between the experimental group and the control group on the 3rd day, 5th day, 7d and 9th day (P > 0.05). Conclusion 1. Higher concentration of olfactory ensheathing cells can be obtained by co-culture of olfactory ensheathing cells. The cell concentration can reach 70%, which can meet the cell requirement of late transplantation. The co-cultured olfactory ensheathing cells secrete nerve growth factor (NGF) at about 10 days (trypsin limit, 3 days after digestion). The xenogeneic nerve scaffold could meet the requirements of the carrier scaffold. The primary cultured olfactory ensheathing cells could grow on the nerve scaffold, and the olfactory ensheathing cells were not affected in the secretion of nerve growth factor after co-culture with the scaffold. The cells secreted growth factors normally, and the xenogeneic nerve scaffolds did not interfere with the normal growth of the cells.
【學(xué)位授予單位】：寧夏醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R745

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本文編號：1971870