發(fā)布時間：2018-05-03 08:59

  本文選題：Sulfiredoxin-1 + 星形膠質細胞��； 參考：《重慶醫(yī)科大學》2015年碩士論文

【摘要】：背景：腦卒中等腦缺血性腦血管疾病發(fā)病率、致殘率與死亡率一直居高不下,給社會及家庭造成嚴重的負擔。腦缺血再灌注損傷使機體產生氧化應激,造成機體活性氧的釋放,使機體的內源性抗氧化防御系統(tǒng)清除能力的平衡失調。星形膠質細胞的損傷在腦缺血疾病中起著至關重要的作用。小分子蛋白Sulfiredoxin-1 (Srxnl),屬于內源性保守的Sulfiredoxin抗氧化家族的成員,具有重要的神經保護作用,可能與抗氧化、抗凋亡以及抗炎癥等作用有關。本課題擬采用慢病毒載體干擾Srxnl基因表達,在體外以OGD誘導大鼠星形膠質細胞氧化應激損傷來模擬腦缺血再灌注,初步探討干擾Sulfiredoxin-1對OGD誘導的星形膠質細胞氧化應激損傷的影響。目的：初步探討干擾Sulfiredoxin-1對OGD誘導的星形膠質細胞氧化應激損傷的影響。方法：(1)篩選氧糖剝奪(OGD)最佳時間,用不同時間的OGD(0 h,2h,4h,6h,8h),復氧24 h,作用于星形膠質細胞,運用MTS和LDH檢測篩選出最佳OGD作用時間。(2)構建三條小發(fā)夾Srxn1干擾慢病毒載體(shRNA-Srxn1-LV3 298, shRNA-Srxn1-LV3 385, shRNA-Srxn1-LV3 456)及一條陰性載體(LV3 NC),運用慢病毒感染技術將各個載體瞬時轉染至星形膠質細胞中,倒置熒光顯微鏡下觀察細胞轉染效率,運用Western blot和QPCR檢測干擾效率,篩選出最佳干擾載體。(3)運用篩選出的最佳OGD時間作用于轉染后的細胞以模擬氧化應激損傷模型。運用MTS和LDH測定細胞的活性和損傷程度。(4)建立完整的Srxn1干擾的星形膠質細胞損傷模型,并運用Western blot檢測Srxn1的蛋白水平,QPCR檢測Srxn1的]mRNA水平。結果：(1)MTS和LDH顯示,OGD 6 h/復氧24 h為最佳的氧化應激模型。(2)倒置熒光顯微鏡觀察結果顯示,慢病毒瞬時感染大鼠星形膠質細胞效果顯著,其轉染效率可達到85%以上。(3) Western blot和QPCR檢測結果顯示,與陰性對照組相比較,shRNA-Srxn1-LV3 298及shRNA-Srxn1-LV3 385的干擾效率不明顯,shRNA-Srxn1-LV3 456的干擾效率顯著(p0.01)。(4)MTS和LDH檢測結果顯示,干擾Srxn1后能導致細胞活性明顯下降,細胞損傷顯著加重(p0.05,p0.01)。結論：Srxn1能保護大鼠星形膠質細胞抵御OGD誘導的氧化應激損傷。
[Abstract]:Background: the morbidity, disability rate and mortality rate of cerebral ischemic cerebrovascular diseases such as stroke have been high all the time. Cerebral ischemia-reperfusion injury resulted in oxidative stress, the release of reactive oxygen species, and the imbalance of the clearance ability of endogenous antioxidant defense system. The injury of astrocytes plays an important role in cerebral ischemic diseases. Sulfiredoxin-1, a member of the endogenous conservative Sulfiredoxin antioxidant family, has important neuroprotective effects, which may be related to anti-oxidation, anti-apoptosis and anti-inflammatory effects. In this study, lentivirus vector was used to interfere the expression of Srxnl gene and OGD was used to induce oxidative stress injury of astrocytes in vitro to simulate cerebral ischemia-reperfusion injury. To investigate the effect of interfering Sulfiredoxin-1 on oxidative stress injury of astrocytes induced by OGD. Aim: to investigate the effect of interfering Sulfiredoxin-1 on oxidative stress of astrocytes induced by OGD. Methods the optimal time for screening oxygen glucose deprivation (Ogd) was determined by 1: 1). The astrocytes were treated with different time of OGD(0 hu 2h, 4hh, 6h, 6h, 8h, reoxygenation, 24 h, respectively. Three small hairpin Srxn1 interfering lentivirus vectors, shRNA-Srxn1-LV3298,shRNA-Srxn1-LV3 385, shRNA-Srxn1-LV3 456) and a negative vector, LV3NCX, were constructed by MTS and LDH detection. The vectors were transiently transfected into astrocytes by lentivirus infection technique. The transfection efficiency was observed under inverted fluorescence microscope. The interference efficiency was detected by Western blot and QPCR. The best interference vector was screened. The best OGD time was used to simulate the oxidative stress injury model. MTS and LDH were used to determine the activity and damage degree of astrocytes. A complete Srxn1 interference model of astrocyte injury was established. The protein level of Srxn1 was detected by Western blot and the mRNA level of Srxn1 was detected by QPCR. Results OGD 6 h / 24 h reoxygenation was the best oxidative stress model. The results of fluorescence microscopy showed that the transient infection of rat astrocytes by lentivirus had a remarkable effect. The results of Western blot and QPCR detection showed that the interference efficiency of shRNA-Srxn1-LV3298 and shRNA-Srxn1-LV3 385 was less than that of the negative control group. The interference efficiency of shRNA-Srxn1-LV3456 was significantly higher than that of the negative control group. After interfering with Srxn1, the cell activity decreased significantly, and the cell damage increased significantly (p 0.05, P 0.01). Conclusion:% Srxn1 can protect astrocytes from oxidative stress induced by OGD.
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R743.3

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 仲偉鑒,印木泉,浦躍樸;煤煙致大鼠肺細胞氧化應激損傷的機制探討[J];勞動醫(yī)學;2000年03期

2 葛圣蕾;;自由基氧化應激損傷在老齡化神經變性疾病中的作用[J];國外醫(yī)學(老年醫(yī)學分冊);2002年06期

3 王云;常志文;;硫氧還蛋白-1:一個新的疾病氧化應激損傷標志物[J];心臟雜志;2011年03期

4 丁銀慧;孫競;錢元霞;李蕓子;高靜;陳峗;;晚期糖基化終產物誘導人主動脈內皮細胞氧化應激損傷及線粒體功能紊亂[J];江蘇大學學報(醫(yī)學版);2014年03期

5 劉朝巍;張濤;楊卓;;氧化應激損傷線粒體參與癲癇病理過程[J];中國病理生理雜志;2008年01期

6 谷峰;董振南;賈興旺;王玲;田亞平;;抗震救災醫(yī)療隊員與受災人員氧化應激損傷指標的比較研究[J];標記免疫分析與臨床;2010年06期

7 陳文豪;陳浩;趙達君;喬慧蓮;易定華;;番茄紅素對血管內皮細胞氧化應激損傷的作用及機制研究[J];現代生物醫(yī)學進展;2014年11期

8 黎涌;招偉賢;;圍術期氧化應激損傷及跨膜信號轉導研究進展[J];國際麻醉學與復蘇雜志;2006年04期

9 張春霞;胡利民;康立源;劉利萍;郭虹;;腦缺血氧化應激損傷及中藥拮抗作用研究進展[J];中華中醫(yī)藥學刊;2007年12期

10 張德迎;魏光輝;何大維;劉星;林濤;李旭良;;葉下珠植物提取物保護鹽酸氮芥對小鼠睪丸組織的氧化應激損傷[J];生殖與避孕;2008年12期

相關會議論文 前10條

1 顏建英;;子癇前期與氧化應激損傷[A];中華醫(yī)學會第三次全國妊娠期高血壓疾病學術研討會論文匯編[C];2011年

2 王詠波;王茜;于振乾;杜建玲;;窖蛋白-1在波動性高糖誘導的內皮細胞氧化應激損傷中的作用及機制[A];中華醫(yī)學會第十次全國內分泌學學術會議論文匯編[C];2011年

3 呂萍萍;范瑩;陳瑩瑩;朱立;沈岳良;;環(huán)加氧酶2抑制劑對抗心肌氧化應激損傷中的作用及機制[A];浙江省生理科學會2006年學術年會論文匯編[C];2006年

4 胡凱騫;張龍澤;陳春英;孫寶云;邢更妹;趙保路;趙宇亮;聶廣軍;;功能化富勒烯衍生物效應探索:延長線蟲壽命和保護氧化應激損傷的分子機理研究[A];第十一次中國生物物理學術大會暨第九屆全國會員代表大會摘要集[C];2009年

5 韓婧;李學軍;;姜黃素通過誘導人內皮細胞產生自噬抗氧化應激損傷[A];全國第十二屆生化與分子藥理學學術會議論文集[C];2011年

6 方朝暉;鮑陶陶;章小平;;2型糖尿病中醫(yī)辨證與氧化應激損傷相關性的研究[A];第九次全國中醫(yī)糖尿病學術大會論文匯編[C];2006年

7 張銘;陳懷生;楊大春;曾智;余敏;;同型半胱氨酸對血管內皮細胞的氧化應激損傷及對IL-8分泌的影響[A];全國第九屆心臟學會第十二屆心功能學會《心臟雜志》編委會聯合學術會議論文集[C];2005年

8 王艷霞;劉儀;張偉;韓東寧;張源淑;;血管緊張素轉化酶2(ACE2)對大鼠腎氧化應激損傷的保護作用及其機制[A];中國生理學會消化內分泌生殖代謝生理專業(yè)委員會2011年消化內分泌生殖學術會議論文摘要匯編[C];2011年

9 張婷;王凡;朱俊東;易龍;付鈺潔;糜漫天;;染料木黃酮對人血管內皮細胞氧化應激損傷的保護作用[A];重慶市營養(yǎng)學會學術會議論文匯編[C];2010年

10 齊華林;王俊;江薇;嚴海東;;瘦素在誘導血管內皮細胞氧化應激損傷中的作用[A];2007年浙滬兩地腎臟病學術年會資料匯編[C];2007年

相關重要報紙文章 前3條

1 張中橋;復方丹參注射液對EPC氧化應激損傷有保護作用[N];中國中醫(yī)藥報;2007年

2 記者 衣曉峰;我國首設中醫(yī)神志病學博士后科研工作站[N];中國中醫(yī)藥報;2014年

3 張中橋;復方丹參注射液對內皮前體細胞氧化應激損傷有保護作用[N];中國醫(yī)藥報;2006年

相關博士學位論文 前10條

1 孔寧;下調miR-100對RGC-5的作用及相關機制研究[D];南方醫(yī)科大學;2015年

2 賈濟;神經元還原穩(wěn)態(tài)減輕氧化應激損傷的新機制[D];第四軍醫(yī)大學;2015年

3 劉靜;氧化應激損傷在赭曲霉毒素A誘導細胞周期阻滯中的作用及其可能機制的研究[D];河北醫(yī)科大學;2012年

4 易龍;黃酮類植物化學物抑制內皮細胞氧化應激損傷的結構—效應關系研究[D];第三軍醫(yī)大學;2010年

5 張立超;抗氧化劑在梗阻性黃疸大鼠中樞神經系統(tǒng)氧化應激損傷中的應用研究[D];河北醫(yī)科大學;2015年

6 符曉華;含二氟亞甲基異黃酮類化合物的合成及抗血管內皮氧化應激損傷活性測定[D];中南大學;2006年

7 葉俊生;左卡尼汀在腎小管上皮細胞氧化應激損傷中的保護作用研究[D];南方醫(yī)科大學;2010年

8 張昱;PJ-34對心肌缺血再灌注損傷的保護作用及其抗氧化應激損傷的機制研究[D];浙江大學;2011年

9 陸志明;高游離脂肪酸誘導血管局部氧化應激損傷的分子機制及中藥干預研究[D];四川大學;2006年

10 王瑞敏;低劑量Genistein誘導eNOS/Nrf2-ARE通路對缺血后神經元氧化應激損傷和空間學習記憶缺陷的保護作用[D];河北醫(yī)科大學;2013年

相關碩士學位論文 前10條

1 周浩;Exendin-4減輕脂肪來源間充質干細胞氧化應激損傷的機制研究[D];中國人民解放軍醫(yī)學院;2015年

2 李貞;枸杞多糖對視網膜神經節(jié)細胞氧化應激損傷的保護作用[D];寧夏醫(yī)科大學;2015年

3 張亞卓;小麥低聚肽對體外氧化應激損傷腸上皮細胞保護作用及其機制的探討[D];河北農業(yè)大學;2015年

4 宋少練;芍藥苷對晚期氧化蛋白產物誘導人臍靜脈內皮細胞氧化應激損傷的干預作用[D];南方醫(yī)科大學;2015年

5 王曉燕;干擾小分子蛋白Sulfiredoxin-1對大鼠星形膠質細胞氧化應激損傷影響的初步研究[D];重慶醫(yī)科大學;2015年

6 周思蕾;RACK1對肝細胞基本功能以及肝細胞氧化應激損傷的影響[D];河南大學;2015年

7 王莉;7-二氟亞甲基-5，4’-二甲烷氧基異黃酮對過氧化氫誘導的血管內皮氧化應激損傷的保護作用研究[D];南華大學;2006年

8 鄒玉凌;綠原酸對氧化應激損傷人視網膜色素上皮細胞保護作用的分子機制[D];南昌大學;2014年

9 鄭媛媛;Nrf2在大鼠HSC氧化應激損傷中的作用及機制[D];第四軍醫(yī)大學;2011年

10 李玉亮;川芎及其有效成分對照射所致機體氧化應激損傷的保護作用[D];第四軍醫(yī)大學;2011年

，

本文編號：1837865