發(fā)布時(shí)間：2018-04-09 15:32

  本文選題：HIF1α　切入點(diǎn)：VEGF　出處：《西南交通大學(xué)》2014年碩士論文

【摘要】：缺血性腦血管病是因腦部供血障礙所引起的腦組織相應(yīng)區(qū)域缺血及缺氧而造成腦組織的破壞,從而出現(xiàn)一系列生化代謝異常、生理功能喪失的疾病,是世界范圍內(nèi)死亡和長期殘疾的主要原因。腦缺血的有效治療主要涉及機(jī)體適應(yīng)缺氧/缺血、血管新生及神經(jīng)元的保護(hù)/再生等方面。 低氧誘導(dǎo)因子(hypoxia-inducible factors, HIF)是細(xì)胞在基因轉(zhuǎn)錄水平協(xié)調(diào)氧變化的最主要的調(diào)節(jié)因子,是一種介導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)低氧反應(yīng)的核轉(zhuǎn)錄復(fù)合體,促進(jìn)其激活有利于缺血性疾病的治療。通過HIF-1α上調(diào)血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)的表達(dá)可在腦和心臟中誘導(dǎo)目標(biāo)區(qū)域形成新的血管,從而增加血流量和氧供應(yīng)并減輕缺血的不良反應(yīng)。血管內(nèi)皮生長因子(ascular endothelial growth factor, VEGF),是內(nèi)皮細(xì)胞(Endothelial cells,ECs)特異性促有絲分裂原,也是作用最強(qiáng),特異性最高的促血管生長因子。發(fā)生腦缺血后,VEGF是血管生成、神經(jīng)保護(hù)和神經(jīng)再生過程中最重要的生長因子。它能夠顯著提高缺血腦部的血管生成,并減少恢復(fù)過程中的神經(jīng)功能損傷。神經(jīng)生長因子(Nerve growth factor, NGF),是神經(jīng)營養(yǎng)因子家族的典型成員,具有神經(jīng)元營養(yǎng)和促突觸生長雙重生物學(xué)功能,對(duì)中樞及周圍神經(jīng)元的發(fā)育、分化、生長、再生和功能特性的表達(dá)均具有重要的調(diào)控作用。NGF除了神經(jīng)保護(hù)以外還可通過促進(jìn)血管再生改善缺血性疾病。因此以HIF1α, VEGF和NGF為靶點(diǎn)篩選腦缺血治療藥物,不僅有助于抗腦缺血藥物的開發(fā),也為藥物抗腦缺血作用機(jī)制研究提供一定的前期基礎(chǔ)。 本研究構(gòu)建了以HIF1α, VEGF, NGF啟動(dòng)子為作用靶點(diǎn)的細(xì)胞篩選模型,可用于高效、分類篩選具有抗腦缺血功效的藥物成分。首先,用HIF1α, VEGF和NGF基因的啟動(dòng)子序列(其中,HIF1α選取了兩個(gè)序列)分別調(diào)控報(bào)告分子紅色熒光蛋白(E2-Crimson,E2)或熒光素酶(Luciferase, Luc)基因的轉(zhuǎn)錄,以此構(gòu)建了8個(gè)重組質(zhì)粒：pHp1-E2, pHp2-E2, pVp-E2, pNp-E2; pHp1-Luc, pHp2-Luc, pVp-Luc, pNp-Luc,其中,Hp, Vp和Np分別表示HIF1α promoter,VEGF promoter和NGF promoter。隨后,用這8個(gè)質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞,建立了24株穩(wěn)定的單克隆細(xì)胞株(每個(gè)質(zhì)粒建立3株細(xì)胞),分別命名為293-pHp1-E2a,b,c,293-pHp2-E2a,b,c,293-pVp-E2a,b,c,293-pNp-E2a,b,c;293-pHp1-Luca,b,c,293-pHp2-Luca,b,c,293-pVp-Luca,b,c和293-pNp-Luca,b,c。再利用二氯化鈷、脂多糖、鹽酸克倫特羅等陽性刺激物分別對(duì)含HIF1α, VEGF, NGF啟動(dòng)子序列的3類細(xì)胞株進(jìn)行功能驗(yàn)證,建立以HIF1α,VEGF,NGF啟動(dòng)子為作用靶點(diǎn)的3類藥物篩選的細(xì)胞模型：293-pHp1-Luc,293-pHp2-Luc,293-pVp-Luc和293-pNp-Luc。最后,應(yīng)用鑒定出的細(xì)胞模型對(duì)25種中藥單體進(jìn)行了篩選,初篩獲得6個(gè)對(duì)VEGF基因轉(zhuǎn)錄有激活作用的中藥單體。 本研究建立的細(xì)胞篩選模型不僅可對(duì)藥物進(jìn)行快速篩選而且可同時(shí)進(jìn)行大致功能分類,并對(duì)其效果進(jìn)行定量判斷。這為尋找新型抗腦缺血藥物及其先導(dǎo)化合物提供了有力工具,也有助于中藥抗腦缺血作用機(jī)制的發(fā)現(xiàn)及其基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制的探索。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：西南交通大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R743.3

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前7條

1 高梅;杜冠華;;抗腦缺血藥物的研究現(xiàn)狀與進(jìn)展[J];中國醫(yī)藥導(dǎo)刊;2006年05期

2 權(quán)晶晶;凌均h，

本文編號(hào)：1727034