發(fā)布時間：2017-10-13 00:00

  本文關(guān)鍵詞：匹羅卡品致大鼠癲癇持續(xù)狀態(tài)后海馬Puma和CytC的表達變化

  更多相關(guān)文章： 癲癇持續(xù)狀態(tài) 匹羅卡品 Puma CytC 大鼠

【摘要】：目的:癲癇是一種常見病,流行病學調(diào)查顯示其發(fā)病率為5‰~7‰。癲癇發(fā)作不僅可引起腦部神經(jīng)元的壞死或病理性凋亡及神經(jīng)生物學改變,而且還常引起患者及家屬嚴重的心理障礙。癲癇持續(xù)狀態(tài)(Status epilepticus,SE)是神經(jīng)科臨床常見的危急重癥,常常導致大腦易損區(qū)海馬組織的損傷,若得不到及時的緩解和治療,死亡率很高。研究發(fā)現(xiàn)Bcl-2蛋白家族中僅具有BH3結(jié)構(gòu)域的P53上調(diào)細胞凋亡調(diào)控因子Puma(P53 up-regulated modulator of apoptosis,Puma)蛋白在細胞凋亡途徑中發(fā)揮了重要的作用。而Cyt C在線粒體外膜滲透性增加的情況下可以釋放出來,參與內(nèi)源性線粒體凋亡途徑。Puma和Cyt C對SE后海馬神經(jīng)元的損傷機制研究較少,本實驗采用匹羅卡品制作SE大鼠動物模型,探討SE后24小時Cyt C和Puma在海馬組織中的表達情況。方法:成年雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠62只,隨機分成實驗組(n=54)和對照組(n=8)。實驗組先應(yīng)用硫酸阿托品以拮抗匹羅卡品的外周膽堿能效應(yīng),隨后通過匹羅卡品腹腔注射制造癲癇模型,根據(jù)大鼠是否發(fā)生SE將其分為癲癇持續(xù)狀態(tài)組(SE組)和非癲癇持續(xù)狀態(tài)組(非SE組)。24小時后取大鼠海馬組織,HE染色觀察海馬CA1區(qū)神經(jīng)元的數(shù)量,TUNEL染色觀察海馬神經(jīng)元的損傷情況。采用Western blot方法測定海馬組織中Puma的表達,免疫組織化學方法檢測海馬組織中Cyt C的含量。運用Pearson相關(guān)分析法分析Puma和Cyt C表達的相關(guān)性。對照組除匹羅卡品用生理鹽水代替外,其余所有操作步驟與實驗組相同。結(jié)果:54只實驗組大鼠中未誘導出SE的有12只,歸入非SE組。成功誘導出SE的有42只,成功率為77.8%。42只SE大鼠中24h之內(nèi)死亡14只,死亡率為33.3%,入SE組28只。對照組和非SE組24小時內(nèi)均未死亡。SE組大鼠海馬CA1區(qū)HE染色神經(jīng)元數(shù)量(54.75±3.37)與對照組(103.75±2.12)和非SE組(100.67±2.19)相比,顯著減少(p0.05)。SE組TUNEL陽性神經(jīng)元數(shù)目(25.14±2.77)與對照組(3.25±2.19)和非SE組(3.33±2.02)相比明顯增加(p0.05)。而且可見SE組海馬組織Cyt C陽性神經(jīng)元的含量(14.11±2.38)較對照組(2.88±2.70)和非SE組(4.42±2.19)明顯增多(p0.05)。并可見SE組海馬組織Puma蛋白的表達(0.439±0.038)較對照組(0.016±0.003)和非SE組(0.249±0.034)明顯增多(p0.05)。相關(guān)性分析顯示SE組Puma蛋白的表達和Tunel染色陽性神經(jīng)元細胞含量之間存在著相關(guān)關(guān)系(r=0.891,p0.01);而且,SE組Puma和Cyt C的含量變化具有相關(guān)性(r=0.895,P0.01)。結(jié)論:大鼠SE后24h海馬神經(jīng)元出現(xiàn)凋亡,而且Puma蛋白的表達和Tunel染色陽性神經(jīng)元細胞含量之間存在著正相關(guān)關(guān)系。Puma和Cyt C在SE大鼠海馬組織神經(jīng)元中的表達含量增加,兩者的表達水平成正相關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：癲癇持續(xù)狀態(tài) 匹羅卡品 Puma CytC 大鼠
【學位授予單位】：上海交通大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R742.1
【目錄】：

• 摘要5-7
• abstract7-11
• 中英文對照11-12
• 第一章：緒論12-16
• 第二章：材料與方法16-32
• 2.1 實驗材料16-21
• 2.1.1 實驗動物16
• 2.1.2 實驗儀器和設(shè)備16-17
• 2.1.3 藥品和試劑17-19
• 2.1.4 試劑制備19-21
• 2.2 實驗方法21-31
• 2.2.1 制作動物模型21-22
• 2.2.2 制作動物標本22-23
• 2.2.3 HE染色23-25
• 2.2.4 TUNEL染色25-26
• 2.2.5 免疫組化染色檢測CytC的表達26-27
• 2.2.6 western blot實驗檢測Puma的表達27-31
• 2.3 統(tǒng)計學分析方法31-32
• 第三章：結(jié)果32-51
• 3.1 造模后各組大鼠的行為表現(xiàn)32-33
• 3.2 大鼠癲癇模型的結(jié)果分析33-40
• 3.2.1 大鼠SE模型成功率和死亡率的結(jié)果33-37
• 3.2.2 大鼠有無癲癇發(fā)作和發(fā)作級別的結(jié)果37-38
• 3.2.3 大鼠癲癇模型的潛伏期和發(fā)作時間的結(jié)果38-40
• 3.3 HE染色結(jié)果分析40-42
• 3.4 TUNEL染色結(jié)果分析42-45
• 3.5 免疫組織化學染色結(jié)果分析45-48
• 3.6 western blot實驗結(jié)果分析48-49
• 3.7 直線回歸與線性相關(guān)結(jié)果分析49-51
• 第四章：討論51-67
• 4.1 癲癇和癲癇動物模型51-55
• 4.1.1 癲癇的病因和發(fā)病機制51-52
• 4.1.2 癲癇動物模型52-55
• 4.2 Bcl-2 蛋白家族和癲癇55-61
• 4.2.1 Bcl-2 蛋白家族的結(jié)構(gòu)和作用55-57
• 4.2.2 細胞凋亡和BH3蛋白57-59
• 4.2.3 Puma蛋白和癲癇59-61
• 4.3 CytC和癲癇61-64
• 4.3.1 CytC和細胞凋亡61-62
• 4.3.2 CytC和癲癇62-64
• 4.4 Puma和CytC的相互作用和關(guān)系64-67
• 4.4.1 Puma和CytC的相互作用64-65
• 4.4.2 Puma和CytC的關(guān)系65-67
• 第五章：結(jié)論和展望67-68
• 5.1 結(jié)論67
• 5.2 展望67-68
• 參考文獻68-73
• 致謝73-75
• 攻讀碩士期間公開發(fā)表的論文和著作75

【參考文獻】

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本文編號：1021642