研究背景 芫花酯甲由瑞香科植物芫花中提取所得，可以抑制P-388，L1210，KB等多種細胞的增殖，抑制DNA，RNA和蛋白的合成，對拓撲異構酶Ⅰ的活性具有顯著的抑制作用，而對腫瘤壞死因子TNF-α，白細胞介素IL-1α和IL-1β的生物合成則并無顯著影響。動物體內實驗的結果表明，芫花酯甲可抑制C57BL／6和BDF₁小鼠Lewis肺癌的發(fā)展和轉移。 盡管許多研究證實芫花酯甲可抑制腫瘤細胞的增殖以及腫瘤的生長，但是其具體的作用途徑目前尚未闡明。為此，我們檢測了芫花酯甲對黑色素瘤A375細胞增殖的影響，肯定了其對黑色素瘤細胞增殖的抑制作用，并從細胞周期阻滯、誘導細胞凋亡以及對蛋白激酶C（PKC）活化作用三個方面解釋了其可能的作用機理，并在小鼠黑色素瘤模型上驗證了芫花酯甲的抗腫瘤活性，為今后研究芫花酯甲的作用機理及將其開發(fā)成為新的抗癌藥物打下基礎。 研究方法 我們采用臺盼藍染料排斥實驗和CCK-8分析法來檢測芫花酯甲對細胞存活率的影響。通過[³H]-胸腺嘧啶摻入實驗分析其對細胞DNA合成的影響。另外，對細胞進行碘化丙啶染色，...

【文章頁數】：121 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
目錄
摘要
Abstract
英文所略表
前言
試驗材料
    1.細胞系及菌株
    2.細胞培養(yǎng)材料
    3.藥品及主要生化試劑
    4.抗體
    5.試劑盒
    6.質粒
    7.動物
    8.主要儀器
    9.溶液的配制
實驗方法
    1.細胞復蘇與培養(yǎng)
    2.細胞凍存
    3.生長抑制實驗
    4.CCK-8法檢測芫花酯甲對細胞活力的影響
    5.³H-TdR摻入法檢測芫花酯甲對細胞DNA合成的影響
    6.碘化丙啶染色流式細胞術檢測芫花酯甲對細胞周期分布的影響
    7.流式細胞術測定芫花酯甲對細胞線粒體膜電勢的影響
    8.磷脂酰絲氨酸外翻分析檢測芫花酯甲對A375細胞的凋亡誘導作用
    9.Bradford法測定蛋白濃度
    10.電泳及相關染色
    11.Western Blot測定細胞內蛋白表達變化情況
    12.芫花酯甲對細胞內鈣離子濃度的影響
    13.PKC的提取純化以及活性測定
    14.質粒的提取、純化及轉染
    15.芫花酯甲對于PKCγ的直接激活作用
    16.建立小鼠黑色素瘤模型測定芫花酯甲對腫瘤生長的抑制作用
    17.芫花酯甲對黑色素瘤轉移性的影響實驗
    18.數據的處理
實驗結果
    1.芫花酯甲抑制A375人黑色素瘤細胞增殖
    2.芫花酯甲對A375細胞活力的影響
    3.芫花酯甲對A375細胞DNA合成的影響
    4.芫花酯甲對A375細胞周期分布的影響
    5.Western blot檢測芫花酯甲對A375細胞周期調控蛋白表達的影響
    6.磷脂酰絲氨酸外翻分析檢測細胞凋亡
    7.芫花酯甲對A375細胞線粒體膜電勢的影響
    8.Western blot檢測芫花酯甲對凋亡相關蛋白表達的影響
    9.芫花酯甲急性給藥對細胞內鈣離子濃度的影響
    10.芫花酯甲長期給藥對細胞內鈣離子濃度的影響
    11.芫花酯甲急性給藥對細胞內蛋白激酶C活性的影響
    12.芫花酯甲對鼠腦PKC粗提物的活性影響
    13.芫花酯甲對純化后的鼠腦PKC活性之影響
    14.芫花酯甲對γ-PKC的激活作用
    15.芫花酯甲對體內黑色素瘤的生長抑制作用
    16.芫花酯甲對黑色素瘤轉移的影響
討論
結論
參考文獻
綜述
    蛋白激酶Cδ與細胞凋亡
    參考文獻
致謝



本文編號：4049406