本課題將基因芯片技術(shù)用于性傳播疾病病原體診斷與檢測(cè)研究，制備了以熒 光標(biāo)記多重不對(duì)稱PCR技術(shù)為基礎(chǔ)的性傳播疾病病原體寡核苷酸檢測(cè)芯片，實(shí)現(xiàn) 了淋球菌、沙眼衣原體和解脲脲原體三種病原體的同時(shí)多樣本檢測(cè)。 通過芯片制備工藝條件研究確定制備性傳播疾病病原體檢測(cè)芯片的最佳方案 是采用長度40mer，3’端雙功能修飾的寡核苷酸探針點(diǎn)制到醛基片上制備芯片。在 此基礎(chǔ)上，設(shè)計(jì)并合成了三種病原體以及熒光素酶基因和大豆基因特異的引物和 探針序列。以此引物和探針對(duì)性病檢測(cè)芯片優(yōu)化結(jié)果顯示：選取點(diǎn)樣液A和雜交 液B，探針序列靠近熒光標(biāo)記引物端，探針濃度以50μM，雜交溫度以42℃，雜交 時(shí)間以60min，PCR產(chǎn)物經(jīng)加熱變性后與雜交液以1：2比例制備檢測(cè)芯片為宜。對(duì) 該芯片的檢測(cè)靈敏度進(jìn)行條件優(yōu)化表明：在25μl PCR反應(yīng)體系中，淋球菌、沙眼 衣原體和解脲脲原體和熒光素酶基因正向引物濃度分別為0． 225μM、0． 135μM、 0． 15μM和0． 3μM，反向Cy3標(biāo)記的熒光標(biāo)記引物濃度分別為2． 25μM、1． 35μM、 1． 5μM和3μM，dNTP為300μM，MgCl2 3mM，KCl 7...

【文章頁數(shù)】：107 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
引言
一、 寡核苷酸芯片制備工藝條件的確定
二、 性傳播疾病病原體寡核苷酸檢測(cè)芯片的制備
三、 熒光標(biāo)記多重不對(duì)稱PCR的靈敏度優(yōu)化
四、 性傳播疾病病原體檢測(cè)芯片的性能評(píng)價(jià)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
發(fā)表文章
    研究論文 性傳播疾病病原體檢測(cè)芯片的制備
文獻(xiàn)綜述 性傳播疾病病原體檢測(cè)方法的研究現(xiàn)狀
文獻(xiàn)綜述 基因芯片及其在性傳播疾病病原體研究中的應(yīng)用



本文編號(hào)：3837629