【摘要】：背景和目的脫發(fā)是一種多基因疾病,其不僅受機(jī)體內(nèi)部基因調(diào)控,同時(shí)也受外部環(huán)境因素影響。氧化應(yīng)激在雄激素禿發(fā)疾病機(jī)制中扮演著重要的作用,尤其是男性模式禿發(fā)患者。毛乳頭細(xì)胞(demal papilla cells,DPCs)具有誘導(dǎo)毛囊形成和調(diào)控毛發(fā)生長(zhǎng)關(guān)鍵作用。氧化應(yīng)激中將導(dǎo)致毛乳頭細(xì)胞增殖減少以及毛發(fā)生長(zhǎng)抑制因子分泌增加。自噬作為真核生物重要的生理過(guò)程,能通過(guò)降解氧化應(yīng)激損傷蛋白維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定。在脫發(fā)疾病中,自噬通過(guò)阻止毛囊干細(xì)胞耗竭被認(rèn)為重要的毛囊細(xì)胞保護(hù)機(jī)制。輕基酪醇(Hydroxytyrosol,HT)是橄欖油主要的抗氧化成分,可激活自噬緩解氧化應(yīng)激炎性損傷。臨床研究表明,地中海飲食有助于降低雄性激素禿發(fā)風(fēng)險(xiǎn)。羥基酪醇作為地中海飲食豐富的來(lái)源之一,其是否能保護(hù)毛囊細(xì)胞促進(jìn)毛發(fā)生長(zhǎng)是個(gè)值得探討的環(huán)節(jié)。因此本實(shí)驗(yàn)將觀察羥基酪醇對(duì)過(guò)氧化氫(H_20_2)處理的DPCs作用。該研究結(jié)果將為脫發(fā)防治提出了新策略,同時(shí)也為地中海飲食有益于毛發(fā)生長(zhǎng)作出新解釋。方法1.HT對(duì)氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的小鼠來(lái)源DPCs生物學(xué)研究原代分離培養(yǎng)鼠觸須墊毛乳頭細(xì)胞,取第三代細(xì)胞加入不同濃度H_2O_2(50,100,200,400umol/ml)處理后24小時(shí),用CCK-8測(cè)量細(xì)胞的增殖活性。接下來(lái)用100 umol/ml H-2O2處理毛乳頭細(xì)胞2小時(shí),DCFH-DA熒光探針檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)ROS表達(dá)量。以上判斷H_2O_2處理后氧化應(yīng)激對(duì)DPCs損傷。為進(jìn)一步觀察HT對(duì)DPCs保護(hù)作用,采用HT 75μM預(yù)處理DPCs 30分鐘,使用PCR,ELISA,DCFH-DA技術(shù)檢測(cè)HT對(duì)H_2O_2處理后的DPCs生物學(xué)活性和特性的影響。2.HT對(duì)氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的小鼠來(lái)源DPCs作用機(jī)制研究采用 100umol/ml H_2O_2和 100umol/ml H_2O_2+75umol/ml HT處理DPCs 2小時(shí),用Western Blot和PCR檢測(cè)細(xì)胞自噬相關(guān)蛋白LC3和基因Beclin-1。為進(jìn)一步明確調(diào)控自噬對(duì)于HT保護(hù)DPCs作用機(jī)制,使用自噬抑制劑氯喹(chloroquine,CQ),再進(jìn)行相關(guān)的生物學(xué)活性和特性的檢測(cè)。結(jié)果1.HT對(duì)小鼠來(lái)源DPCs氧化應(yīng)激中的生物學(xué)研究CCK-8結(jié)果顯示,與空白對(duì)照組相比,H_2O_2對(duì)細(xì)胞的活性下降呈濃度依賴性。H_20_2處理后ROS水平以及炎性因子(IL-6,TNF-α)明顯升高,毛發(fā)生長(zhǎng)因子(FGF,PDGF,VEGF)分泌降低。由此可見(jiàn),H_2O_2對(duì)DPCs具有細(xì)胞毒性。相反,使用HT預(yù)處理的DPCs明顯改善了 H_2O_2.對(duì)細(xì)胞的氧化應(yīng)激損害。2.HT對(duì)小鼠來(lái)源的DPCs氧化應(yīng)激中機(jī)制研究H_2O_2處理后的DPCs明顯降低了細(xì)胞LC3和Beclin-1表達(dá),提示H_2O_2抑制自噬的表達(dá)。相反HT預(yù)處理的DPCs逆轉(zhuǎn)了這一趨勢(shì),明顯增強(qiáng)了自噬的表達(dá)。加入自噬抑制劑氯喹,HT所介導(dǎo)的氧化應(yīng)激中DPCs保護(hù)作用被明顯逆轉(zhuǎn),進(jìn)一步論證調(diào)節(jié)自噬是HT保護(hù)DPCs免受氧化應(yīng)激損傷的重要機(jī)制。結(jié)論HT通過(guò)增強(qiáng)自噬保護(hù)DPCs,緩解氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的炎性損傷,促進(jìn)毛發(fā)生長(zhǎng)因子分泌。
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R758.71
【圖文】：

果逡逑．邐Ｈ２0２介導(dǎo)的氧化應(yīng)激損傷導(dǎo)致ＤＰＣｓ細(xì)胞活性降低逡逑將ＤＰＣｓ暴露于不同濃度的Ｈ２０２加藥處理２４ｈ，ＣＣＫ－８細(xì)胞活性結(jié)果顯示：逡逑對(duì)照組相比，暴露于不同濃度５０，１００，邋２００和４００邋ｕｍｏｌ／ｍｌＨ２０２后ＤＰＣｓ細(xì)逡逑活性明顯降低，并呈濃度依賴性。由此可見(jiàn)，Ｈ２０２對(duì)ＤＰＣｓ具有細(xì)胞毒性。逡逑（詳見(jiàn)ｆｉｇｕｒｅｌ）為了更好地觀察后續(xù)實(shí)驗(yàn)以及文獻(xiàn)查閱，我們選用了濃度適中逡逑００邋ｕｍｏｌ／ｍｌ邋Ｈ２０２進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。逡逑．邐ＨＴ提高氧化應(yīng)激狀態(tài)下ＤＰＣｓ細(xì)胞活性逡逑上述結(jié)果表明，Ｈ２０２處理后ＤＰＣｓ的ＤＰＣｓ生存活性明顯降低。接下來(lái)，逡逑用ＨＴ預(yù)敷ＤＰＣｓ邋３０ｍｉｎ，然后再加入不同濃度Ｈ２０２，我們可以觀察到不同濃逡逑下ＨＴ＋Ｈ２０２組相對(duì)于單獨(dú)Ｈ２０２組生存活性明顯升高。據(jù)此，我們初步得出逡逑Ｔ可以緩解ＤＰＣｓ氧化應(yīng)激損傷增強(qiáng)細(xì)胞活性。（詳見(jiàn)ｆｉｇｕｒｅｌ－１）逡逑２．0ｎ逡逑

圖１－３使用ＨＴ邋（７５｜ＩＭ）孵育１小時(shí)，加入Ｈ２０２刺激２４小時(shí)

圖１－４使用ＨＴ邋（７５［ｉＭ）孵育１小時(shí)，加入Ｈ２0２刺激２４小時(shí)

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本文編號(hào)：2765210