【摘要】：背景:銀屑病是一種常見的慢性炎癥性皮膚病。其病因和發(fā)病機制不清。目前考慮其發(fā)病主要原因與感染、環(huán)境、遺傳等具有一定相關性。目前作為銀屑病可能病因之一的體表微生物的相關研究較少,并且其研究對象多以尋常型銀屑病為主,而針對具有上呼吸道感染史的急性點滴型銀屑病患者皮損表面微生物的研究則是空白。目的:收集急性點滴型銀屑病患者皮膚表面微生物樣本,進行16SrDNA基因二代測序分析。通過測序分析結果觀察其皮損表面微生物與健康人皮膚表面微生物多樣性、微生物群落結構差異及兩組間差異物種,并進一步評價此差異與急性點滴型銀屑病發(fā)病的相關性。方法:臨床病例取材為天津市中醫(yī)藥研究院附屬醫(yī)院門診確診的急性點滴型銀屑病患者11例,對照組選擇與患者組年齡相近,性別一致的外觀正常的健康人11例,使用無菌棉拭子分別對患者組與對照組相一致的部位進行取材,每個部位加壓取材不少于30s,并收集到無菌離心管中,置于低溫冰箱備用。隨后進行DNA抽提、質檢,PCR擴增,擴增產物的混樣及提純,構建文庫、上機測序,對樣本進行生物注釋。最后采用Alpha多樣性分析物種復雜度、Beta多樣性分析樣本間物種結構差異性,t檢驗及LEfSe分析組間差異物種。結果:(1)OTU聚類結果表明樣本間分布均勻,兩組各樣本在門水平上組成相似,無差異,以變形菌門(Proteobacteria)、放線菌門(Actinobacteria)、厚壁菌門(Firmicutes)為主。(2)Alpha多樣性分析樣品復雜度結果表示兩組無顯著差異,多樣性指數經統計分析,p=0.592。Beta多樣性分析兩組間微生物群落結構結果表示兩組無顯著差異,β多樣性指數統計分析,p=0.556。各樣本微生物群落結構相似性分析表示兩組在微生物群落結構上存在差異趨勢。(3)兩組間發(fā)現不動桿菌屬(Acinetobacter)為差異物種,并且在患者組中起主要作用,經t檢驗篩選屬水平具有顯著差異的物種,不動桿菌屬為豐度最高的具有顯著差異的物種,p=0.047,此外,藍藻菌門未命名的葉綠體屬在兩組對比中存在統計學差異,p=0.037。結論:初發(fā)或者復發(fā)的具有上呼吸道感染史的急性點滴型銀屑病病例,其皮損表面微生物可能正在由一個穩(wěn)定狀態(tài)發(fā)展到另一個穩(wěn)定狀態(tài),這種改變可能與疾病的發(fā)展程度有關,而不動桿菌屬可能在此變化中起到一定作用。但不動桿菌屬與具有上呼吸道感染史的急性點滴型銀屑病發(fā)病的因果關系有待確定。一定豐度的藍藻菌門葉綠體綱及以下水平的物種可能參與維持正常皮膚的生態(tài)微生物的穩(wěn)定。
【圖文】：

圖 1a.1-19 二次實驗樣本的 DNA 瓊脂糖凝膠電泳圖圖 1b.35-44 預實驗樣本 DNA 瓊脂糖凝膠電泳圖注：圖 1a，b，中標為標準品，上樣 5μL(10ng/μL)；M-1 為 Trans 2k plus，上樣 2μL；M-2 為 Trans15k plus，上樣 2μL；白色數字為樣本序列號，原液上樣 5μL。

12圖 1b.35-44 預實驗樣本 DNA 瓊脂糖凝膠電泳圖注：圖 1a，b，中標為標準品，上樣 5μL(10ng/μL)；M-1 為 Trans 2k plus，上樣 2μL；M-2 為 Trans15k plus，上樣 2μL；白色數字為樣本序列號，原液上樣 5μL。序列號由 1 到 19 為后期正式實驗結果，序列號由 35 到 44 的 10 個條帶為前期 6 例樣本的預實驗結果（部分樣本包含多個序號）。從圖中可看出樣本有輕微的彌散和雜帶，無其他顏色，無雜質或 RNA 污染。根據 DNA 抽提質量（m）與以上 DNA 瓊脂糖凝膠電泳顯示條帶情況綜合分析，m 不小于 200ng 為 A 等級，m 不足 200ng 為 B 等級，，m 小于 100ng 為 C等級。A 等級表示樣本產物目的條帶大小正確，總量滿足 2 次或者 2 次以上建庫，樣本可進行后續(xù)實驗；B 等級表示樣本產物目的條帶大小正確，總量滿足 1次但不足 2 次建庫需要，可嘗試進行后續(xù)實驗或啟用備份樣本；C 等級表示樣本
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R758.63

【參考文獻】

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本文編號：2599283