目的:通過將老年人血清作用臍靜脈血管內(nèi)皮細胞后,觀察衰老機體血清對血管內(nèi)皮細胞生物學(xué)活性的影響;研究衰老機體血清對內(nèi)皮細胞的炎性介質(zhì)分泌的作用;了解調(diào)控內(nèi)皮細胞炎性介質(zhì)的NF-κB-Jmjd3信號通路的活化情況,分析其可能的表觀遺傳學(xué)調(diào)控機制。期望對與衰老相關(guān)性疾病的診斷及治療提供新思路和新靶點。方法:1、研究對象的選擇及分組:青年組:20～30歲健康體檢者16例,平均年齡(25.60±1.97)歲;老年組:60～70歲健康體檢者16例,平均年齡(66.60±4.78)歲;高齡老年組16例:80歲以上健康老年人,平均年齡(85.86±5.79)歲。取清晨空腹靜脈血5ml,離心后分離血清分裝后放入-80℃冰箱冷凍待用。實驗時,將冷凍收集好的血清按健康青年組(25y)、健康老年組(65y)、健康高齡老年組(85y)分別混合制成3個標本池。2、臍靜脈血管內(nèi)皮細胞(HUVECs)的分離、培養(yǎng)、復(fù)蘇、傳代、鑒定:取傳代至3～5代的細胞于對數(shù)生長期進行實驗,隨機分組為25y,65y和85y組,分別以健康青年組、健康老年組和健康高齡老年樣本池中的血清配成條件培養(yǎng)基作用HUVECs細胞;根據(jù)檢測需要分別...

【文章頁數(shù)】：77 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 引言
第2章 實驗材料及方法
    2.1 材料
        2.1.1 主要試劑及材料
        2.1.2 主要儀器設(shè)備
    2.2 實驗方法
        2.2.1 器材的準備
        2.2.2 主要溶液的配制
        2.2.3 HUVECs的分離、培養(yǎng)、傳代及鑒定
        2.2.4 研究對象的選擇及其血清標本的收集
        2.2.5 CCK8法檢測細胞活力
        2.2.6 細胞衰老β-半乳糖苷酶染色實驗
        2.2.7 流式細胞術(shù)分析細胞周期
        2.2.8 流式細胞儀分析細胞活性氧水平
        2.2.9 劃痕實驗
        2.2.10 免疫熒光染色技術(shù)觀察各組血清誘導(dǎo)HUVECs后，內(nèi)皮細胞內(nèi)NF-κB/p65的核表達變化
        2.2.11 免疫熒光染色技術(shù)觀察各組血清誘導(dǎo)HUVECs后，內(nèi)皮細胞內(nèi)Jmjd3的表達變化
        2.2.12 免疫熒光染色技術(shù)觀察各組血清誘導(dǎo)HUVECs后，內(nèi)皮細胞內(nèi)H3K27me3的表達變化
        2.2.13 細胞免疫熒光染色技術(shù)觀察各組血清誘導(dǎo)HUVECs后，細胞內(nèi)H3K27me2的表達變化
        2.2.14 熒光實時定量PCR(qRT-PCR)測定內(nèi)皮細胞炎性介質(zhì)和粘附分子的表達
        2.2.15 Luminex技術(shù)分析各組血清池中炎性介質(zhì)蛋白水平
    2.3 統(tǒng)計學(xué)處理
第3章 結(jié)果
    3.1. 血清池中炎性介質(zhì)的蛋白水平
    3.2. 臍靜脈內(nèi)皮細胞的形態(tài)及鑒定
    3.3. 內(nèi)皮細胞活性變化
    3.4. 內(nèi)皮細胞衰老情況
    3.5. 內(nèi)皮細胞周期的變化
    3.6. 內(nèi)皮細胞氧化應(yīng)激反應(yīng)的變化
    3.7. 內(nèi)皮細胞遷移修復(fù)能力的變化
    3.8. 內(nèi)皮細胞內(nèi)NF-ΚB/p65核轉(zhuǎn)位及表達的變化
    3.9. 內(nèi)皮細胞內(nèi)Jmjd3表達的變化
    3.10. 內(nèi)皮細胞內(nèi)HEK27ME3表達的變化
    3.11. 內(nèi)皮細胞內(nèi)HEK27ME2表達的變化
    3.12. 內(nèi)皮細胞炎性介質(zhì)和粘附分子的基因表達情況
第4章 討論
第5章 結(jié)論
第6章 本論文的創(chuàng)新點
致謝
參考文獻
攻讀學(xué)位期間的研究成果
綜述
    參考文獻



本文編號：4023391