目的:糖尿病已成為嚴(yán)重威脅人類健康的慢性疾病之一。胰島素抵抗是2型糖尿病的主要特征,而骨骼肌中的胰島素抵抗已成為許多研究和評(píng)論的焦點(diǎn)。孤兒核受體Nur77是核受體超家族中的一員,也是糖代謝過(guò)程中的關(guān)鍵調(diào)節(jié)蛋白,在糖代謝過(guò)程中發(fā)揮著重要的調(diào)控作用。而p38MAPK是MAPK家族的重要成員,在各種細(xì)胞外刺激下被激活,參與炎癥過(guò)程,細(xì)胞生長(zhǎng)和分化,細(xì)胞周期和細(xì)胞死亡,同時(shí)許多研究發(fā)現(xiàn)活化的p38 MAPK可以增加GLUT4介導(dǎo)的葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)。因此本研究應(yīng)用C2C12肌管為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,研究在脂毒性狀態(tài)下Nur77與p38MAPK之間是否存在相互作用進(jìn)而影響GLU4介導(dǎo)的葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)。方法:棕櫚酸處理C2C12肌管造成胰島素抵抗模型,檢測(cè)脂毒性狀態(tài)下細(xì)胞葡萄糖攝取水平、24h葡萄糖消耗水平以及Nur77、GLUT4總蛋白水平和GLUT4膜蛋白水平。構(gòu)建過(guò)表達(dá)Nur77慢病毒和敲低Nur77慢病毒,分別感染C2C12肌管,檢測(cè)細(xì)胞葡萄糖攝取水平、24h葡萄糖消耗水平以及GLUT4總蛋白和膜蛋白水平。在胰島素抵抗模型基礎(chǔ)上,過(guò)表達(dá)Nur77并給予p38MAPK特異性抑制劑SB203580,檢測(cè)細(xì)胞葡萄糖攝...

【文章頁(yè)數(shù)】：62 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖1.2四種質(zhì)粒共同轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞

中國(guó)醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文圖1.1構(gòu)建過(guò)表達(dá)Nur77質(zhì)粒A：帶BspeI酶切位點(diǎn)的Nur77CDS序列行瓊脂糖凝膠電泳（1.8kb）；B：BspeI限制性內(nèi)切酶分別單酶切RpLenti-GFP和Nur77CDS序列后行瓊脂糖凝膠電泳(7.5kb和1....

圖1.3qPCR測(cè)定慢病毒濃度A:各樣品CT值及濃度；B:標(biāo)準(zhǔn)曲線

圖1.3qPCR測(cè)定慢病毒濃度A:各樣品CT值及濃度；B:標(biāo)準(zhǔn)曲線。3.1.4檢測(cè)慢病毒感染效率慢病毒感染293T細(xì)胞48h后，觀察熒光，對(duì)照（CON）慢病毒感染效率可達(dá)到80%左右，過(guò)表達(dá)Nur77慢病毒感染效率可達(dá)到60%左右（圖1.4，A）。7....

圖1.4檢測(cè)慢病毒感染效果

圖1.4檢測(cè)慢病毒感染效果A:慢病毒感染目的細(xì)胞48h后熒光;B:慢病毒感染目的細(xì)胞72h后RNA水平;C:慢病毒感染目的細(xì)胞72h后蛋白水平。各實(shí)驗(yàn)均獨(dú)立重復(fù)三次，***代表P<0.0013.2構(gòu)建敲低Nur77慢病毒3.2.1構(gòu)建重組shRNA....

圖2.2鑒定重組shRNA質(zhì)粒敲低效果

圖2.1構(gòu)建重組敲低Nur77質(zhì)粒A:AgeI和EcoRI雙酶切鑒定質(zhì)粒（7kb和1.9kb）;B:限制性內(nèi)切酶EcoRI單酶切重組shRNA-Nur77質(zhì)粒后行瓊脂糖凝膠電泳（7kb）;C:限制性內(nèi)切酶EcoRI和NcoI雙酶切重組shRNA-N....

本文編號(hào)：3959048