發(fā)布時間：2020-08-01 15:45

【摘要】：目的:通過觀察和測量煤煙燃燒產生的細顆粒物(Particulate matter 2.5,PM2.5)對卵清白蛋白(Ovalbumin,OVA)建立的哮喘小鼠模型的炎性損傷及病理改變,研究煤煙PM2.5對OVA建立的哮喘小鼠模型體內與天然免疫關系密切的白細胞介素(Interleukin,IL)、細胞炎性因子表達的影響,為揭示燃煤PM2.5參與和加重哮喘的相關途徑和機制提供依據。方法:1.PM2.5采集:以某地散裝煙煤為樣,采用空氣采樣器,裝備PM2.5濾膜,燃煤燃燒時進行PM2.5采集,采集完畢后對濾膜進行超聲水洗,過濾后低溫真空干燥。2.動物分組和模型建立:將40只6周齡雄性昆明小鼠隨機分為四組(Control組、OVA組、PM2.5組、OVA+PM2.5組)。致敏階段OVA組及OVA+PM2.5組腹腔注射10μgOVA和1mgAl(OH)3混懸液,Control組及PM2.5組腹腔注射等量的PBS,1周/次,共3次。激發(fā)階段OVA組及OVA+PM2.5組采取霧化吸入PBS配置的10mg/mlOVA進行激發(fā),Control組及PM2.5組采取霧化吸入PBS,每次30min,1次/3day,共六次,其中PM2.5組及OVA+PM2.5霧化吸入前鼻腔滴注4μg/μl的PM2.5混懸液5μl,左右鼻孔各一次。3.組織處理和因子檢驗:組織采集在染毒完畢后24小時內進行。主要采集小鼠支氣管肺泡灌洗液、右上肺組織。BALF離心后分離沉淀涂片,鏡下觀察炎性細胞分布,上清液酶聯免疫吸附法檢測IL-4、IL-7、IL-8、IL-17、轉化生長因子β1(Transforming growth factorβ1,TGF-β1)、γ干擾素(Interferonγ,IFN-γ)、血清內特異性免疫球蛋白(Immunoglobulins,Ig)E、IgG1。肺組織與電鏡切片取后送檢,Real-time Polymerrase chain reaction(RT-PCR)檢測肺組織內IL-7mRNA、IFN-γmRNA的水平。結果:1.Control組小鼠行為正常,無明顯改變;OVA組小鼠可觀察到抓耳洗面行為,呼吸偶有起伏劇烈;PM2.5組小鼠偶見抓耳,煩躁不安;OVA+PM2.5組小鼠呼吸可聞及加深加快,多數出現抓耳行為,煩躁易怒。肉眼觀察肺組織Control組小鼠肺部色澤粉紅,邊緣輪廓平滑,無明顯形態(tài)學異常;OVA組肺偶見水腫,表面較粗糙;PM2.5組肺色澤較灰暗,偶見水腫,肺底表面較為粗糙;OVA+PM2.5組肺色澤異常,出現白色或半透明病理改變,水腫明顯,組織疏松,肺部表面失去光澤,彈性減少,邊緣粗糙,出現明顯的缺口狀改變。2.小鼠BALF中炎性細胞分布,OVA組單核細胞(Monocyte,Mon)、淋巴細胞(Lymphocyte,Lym)、中性粒細胞(Neutrophil,Neu)、嗜酸性粒細胞(Eosinophil,Eos)、細胞總數較Control組明顯增加(p0.05);PM2.5組Mon、Lym、Neu、Eos、細胞總數較Control組明顯增加(p0.05);OVA+PM2.5組Mon、Lym、Neu、Eos、細胞總數較其余三組均明顯增加(p0.05)。肺組織切片進行劉氏染色后鏡下見Control組無明顯改變;OVA組可見大量嗜酸性粒細胞聚集,支氣管壁及周圍可見單核細胞及淋巴細胞,粘膜上皮細胞出現變形,脫落;PM2.5組肺泡內出現嗜酸性粒細胞聚集,可見充血紅腫肺泡,與OVA組相比,炎性細胞較少;OVA+PM2.5組肺組織、支氣管周圍內大量炎性細胞聚集,組織間浸潤明顯,支氣管粘膜上皮嚴重脫落,管內大量滲出。電鏡結果:Control組毛細血管管腔部分可見中性粒細胞,II型上皮細胞胞質中可見豐富嗜鋨板層小體;OVA組毛細血管管腔個別可見中性粒細胞,II型上皮細胞胞質中可見少量嗜鋨板層小體,板層小體排空。線粒體未見明顯異常,細胞表面微絨毛樣突起減少、消失,可見巨噬細胞浸潤;PM2.5組可見I型上皮細胞個別腫脹明顯,II型上皮細胞胞質中可見少量嗜鋨板層小體,板層小體排空,線粒體腫脹,細胞表面微絨毛樣突起消失;OVA+PM2.5組可見I型上皮細胞個別腫脹明顯,II型上皮細胞胞質中可見少量嗜鋨板層小體,板層小體排空,線粒體腫脹,偶見巨噬細胞,個別肺泡隔明顯束狀膠原纖維。Elisa檢測結果,IL-4:OVA組、PM2.5組、OVA+PM2.5組均高于Control組(p0.05),OVA+PM2.5組高于其余三組(p0.05),F=26.884;IL-7:PM2.5組與Control組無明顯差異(p=0.776),其余組從低到高排列如下PM2.5OVAOVA+PM2.5(p0.05),F=15.327;IL-8:OVA+PM2.5組高于Control組、OVA組及PM2.5組(p0.05),OVA組及PM2.5組均高于Control組(p0.05),F=45.324;IL-17:四組從低到高排列如下ControlOVAPM2.5OVA+PM2.5(p0.05),F=26.744;IFN-γ:PM2.5組與Control組無明顯差異(p=0.071),其余組間均有差異(p0.05),F=17.526;TGF-β:PM2.5組與Control組無明顯差異(p=0.144),其余組間均有差異(p0.05),F=144.332。IgE:四組從低到高排列如下:ControlOVAPM2.5OVA+PM2.5,(p0.05),F=19.374;OVA-IgG1:OVA組、PM2.5組、OVA+PM2.5組均高于Control組(p0.05),OVA組高于PM2.5組(p0.05),F=33.611。RT-PCR檢測,IL7 mRNA組間僅有上升趨勢(p0.05),F=0.028;IFN-γmRNA OVA組、PM2.5組、OVA+PM2.5組的表達量低于Control組,(p0.05),F=63.651。3.IL-17析因分析結果顯示OVA與PM2.5單獨作用均可使小鼠IL-17水平上升(p0.05),且二者之間存在協(xié)同作用(p0.05),可能存在交互作用。結論:燃煤PM2.5在OVA誘導哮喘小鼠模型中通過影響與IL-17相關的炎癥因子,改變調節(jié)性T細胞(Regulatory cell,Treg)/輔助性T細胞(T helper cell,Th)平衡,進而加重哮喘小鼠呼吸道炎性損傷及組織結構改變。
【學位授予單位】：遵義醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R562.25
【圖文】：

2 結果.1 動物行為學觀察Control 組小鼠行為正常，無明顯改變；OVA 組小鼠可觀察到抓耳洗面行為，呼有起伏劇烈；PM2.5 組小鼠偶見抓耳，煩躁不安；OVA+PM2.5 組小鼠呼吸可聞深加快，抓耳頻率明顯增加，煩躁易怒。.2 肺部大體觀察Control 組小鼠肺部色澤粉紅，邊緣輪廓平滑，無明顯形態(tài)學異常；OVA 組肺偶腫，表面較粗糙；PM2.5 組肺色澤較灰暗，偶見水腫，肺底表面較為粗糙；VA+PM2.5 組肺色澤異常，出現白色或半透明病理改變，水腫明顯，組織疏松，表面失去光澤，彈性減少，邊緣粗糙，出現明顯的缺口狀改變。

遵義醫(yī)學院碩士學位論文 唐寅2.3 小鼠 BALF 細胞分布圖 2 為小鼠 BALF 中炎性細胞分布，OVA 組 Mon、Lym、Neu、Eos、細胞總數較Control 組明顯增加(p<0.05)；PM2.5 組 Mon、Lym、Neu、Eos、細胞總數較 Control組明顯增加(p<0.05)，但與 OVA 組均無明顯差異(p 值均大于 0.05)；OVA+PM2.5 組Mon、Lym、Neu、Eos、細胞總數較其余三組均明顯增加(p 值均小于 0.05)。

注：A 為 Control 組；B 為 OVA 組；C 為 PM2.5 組；D 為 OVA+PM2.5 組圖 5：小鼠肺 HE 染色切片.5 電鏡結果Control 組毛細血管管腔部分可見中性粒細胞，I 型上皮細胞未見異常，II 型上皮胞胞質中可見豐富嗜鋨板層小體。線粒體未見明顯異常，未見炎性細胞浸潤；OV可見毛細血管管腔個別可見中性粒細胞，I 型上皮細胞未見異常，II 型上皮細胞中可見少量嗜鋨板層小體，板層小體排空。線粒體未見明顯異常，細胞表面微絨突起減少、消失，可見巨噬細胞浸潤；PM2.5 組可見 I 型上皮細胞個別腫脹明顯I 型上皮細胞胞質中可見少量嗜鋨板層小體，板層小體排空。線粒體腫脹，細胞表絨毛樣突起消失，未見增生；OVA+PM2.5 組可見 I 型上皮細胞個別腫脹明顯，上皮細胞胞質中可見少量嗜鋨板層小體，板層小體排空。線粒體腫脹，偶見巨噬

【參考文獻】

相關期刊論文 前10條

1 房魏;李云;李應配;蔣建華;朱啟星;沈彤;;母鼠攝入BPA對子代AHR mRNA表達和Th17細胞的影響[J];安徽醫(yī)科大學學報;2015年07期

2 李鵬飛;楊季國;;作用于ERK信號通路的哮喘相關因子研究[J];浙江中西醫(yī)結合雜志;2014年08期

3 俞捷;張龍舉;許潔;;室內空氣污染對亞洲兒童呼吸系統(tǒng)的影響(英文)[J];遵義醫(yī)學院學報;2014年02期

4 馬利英;董澤琴;吳可嘉;潘軍;;貴州農村地區(qū)冬季典型燃料產生的室內空氣PM_(2.5)和CO排放污染特征研究[J];地球與環(huán)境;2013年06期

5 歐琪亮;丁宋軍;李云;房魏;李美玲;沈彤;;出生前后雙酚A暴露對小鼠不同時期血清白介素-17白介素-23的影響[J];安徽醫(yī)學;2013年05期

6 丁宋軍;李云;房魏;沈彤;;圍生期高劑量雙酚A暴露對仔鼠生命早期調節(jié)性T細胞的影響[J];安徽醫(yī)科大學學報;2013年01期

7 陳麗婷;陳燕惠;;下丘腦-垂體-腎上腺皮質軸與多巴胺系統(tǒng)的相互調節(jié)作用[J];中國兒童保健雜志;2012年12期

8 金華良;董競成;;支氣管哮喘與下丘腦-垂體-腎上腺軸[J];中華結核和呼吸雜志;2012年07期

9 宋麗艷;郭云波;鄧親愷;李金明;;基于ABM探討吸煙對重度哮喘影響的機制[J];北京生物醫(yī)學工程;2012年02期

10 劉曉宇;閆浩;朱清仙;李荔;劉志剛;;標準化粉塵螨疫苗免疫治療哮喘小鼠肺組織病理變化動態(tài)觀察[J];熱帶醫(yī)學雜志;2011年11期

相關博士學位論文 前2條

1 紀笑英;Th2/Th17偏轉微環(huán)境對人支氣管上皮細胞重塑的作用及其機制研究[D];中南大學;2013年

2 蔣敏;TH17細胞及其功能狀態(tài)在中性粒細胞哮喘發(fā)病中的作用及相關分子機制[D];廣西醫(yī)科大學;2013年

相關碩士學位論文 前2條

1 李克彬;室內燃煤細顆粒物對卵蛋白誘導哮喘大鼠氣道炎癥的作用[D];遵義醫(yī)學院;2017年

2 羅清清;雌激素和雙酚A快速影響發(fā)育中大鼠海馬NMDA受體活性及其機制[D];浙江師范大學;2010年

本文編號：2777664