【摘要】：目的:巨噬細(xì)胞內(nèi)攝并降解甘油三酯的功能在肥胖脂肪組織中受損會(huì)加重脂肪累積和脂肪細(xì)胞胰島素抵抗癥狀。ATP6V0d2作為V-ATPase的亞基之一,特異性高表達(dá)與巨噬細(xì)胞并可能影響溶酶體酸化及膜融合,與巨噬細(xì)胞降解功能密切相關(guān)。本論文探究巨噬細(xì)胞ATP6V0d2蛋白在脂肪代謝、肥胖發(fā)生發(fā)展,及胰島素抵抗病理進(jìn)程中的作用。方法:1)構(gòu)建野生型與Atp6v0d2-/-小鼠高脂飲食誘導(dǎo)的肥胖模型,觀測(cè)體重、體脂比、血脂、血糖水平變化;2)分離純化肥胖模型小鼠的骨髓來源巨噬細(xì)胞,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)野生型與Atp6v0d2-/-小鼠巨噬細(xì)胞M1/M2極化差異;3)提取小鼠骨髓來源巨噬細(xì)胞、胚胎成纖維干細(xì)胞及成熟脂肪細(xì)胞蛋白,Western blot檢測(cè)ATP6V0d2蛋白在脂肪組織主要細(xì)胞組分中的表達(dá)水平;4)分離純化野生型與Atp6v0d2-/-小鼠骨髓來源巨噬細(xì)胞,模擬肥胖脂肪組織環(huán)境給予飽和脂肪酸刺激,油紅O染色細(xì)胞爬片,觀察細(xì)胞內(nèi)甘油三酯蓄積量差異;5)提取脂肪酸刺激后的野生型與Atp6v0d2-/-骨髓來源巨噬細(xì)胞的RNA,RT-PCR檢測(cè)脂肪合成與降解主要相關(guān)基因的m RNA水平;6)提取脂肪酸刺激前后的野生型小鼠骨髓來源巨噬細(xì)胞RNA,RT-PCR檢測(cè)Atp6v0d1和Atp6v0d2的m RNA水平變化;7)提取肥胖和正常野生型小鼠的骨髓來源巨噬細(xì)胞蛋白,Western blot檢測(cè)ATP6V0d2蛋白水平變化。結(jié)果:1)Atp6v0d2-/-肥胖小鼠體重增長率和基礎(chǔ)血糖水平高于野生型,且骨髓巨噬細(xì)胞M1型極化趨勢(shì)較強(qiáng),M2型極化比例顯著低于野生型小鼠。2)脂肪組織中,巨噬細(xì)胞特異性高表達(dá)ATP6V0d2蛋白;脂肪酸刺激后Atp6v0d2-/-巨噬細(xì)胞的脂滴數(shù)量多于野生型,但脂肪代謝相關(guān)酶轉(zhuǎn)錄水平無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。3)脂肪酸刺激會(huì)下調(diào)巨噬細(xì)胞Atp6v0d2的m RNA水平,長期給予高脂飼料則可抑制野生型小鼠ATP6V0d2蛋白表達(dá)。結(jié)論:脂肪組織中,ATP6V0d2主要表達(dá)于巨噬細(xì)胞,參與巨噬細(xì)胞對(duì)甘油三酯的降解過程,但并非通過調(diào)節(jié)脂代謝相關(guān)酶轉(zhuǎn)錄起作用。ATP6V0d2蛋白缺失的小鼠巨噬細(xì)胞向M2型極化受抑制,體重增長加快,基礎(chǔ)血糖水平更高。此外,脂肪酸對(duì)于ATP6V0d2的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)具有負(fù)向調(diào)節(jié)的作用。
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R589.2
【圖文】：

華 中 科 技 大 學(xué) 碩 士 學(xué) 位 論 文結(jié)果一、 ATP6V0d2 蛋白在小鼠肥胖發(fā)展中的作用1. Atp6v0d2-/-小鼠體重增長速度更快為了研究 ATP6V0d2 在肥胖過程中的作用，我們用 TALEN 技術(shù)構(gòu)建了Atp6v0d2 基因敲除小鼠，選取雄性 5-7 周體重接近的野生型和 Atp6v0d2-/-小鼠構(gòu)建高脂飲食肥胖模型。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)在四組小鼠每周平均攝入熱量一致的前提下，高脂喂養(yǎng)自第 5 周起，Atp6v0d2-/-高脂組小鼠每周體重增長率逐漸高于野生型（P= 0.039），食用普通飼料的對(duì)照組則無差別；至第 11 周時(shí)，Atp6v0d2-/-高脂組小鼠體重增長率遠(yuǎn)高于其他三組（圖 1）。這組數(shù)據(jù)顯示在攝入高脂飼料時(shí)，Atp6v0d2-/-小鼠的肥胖進(jìn)程較野生型小鼠發(fā)展更快。

圖 2.高脂喂養(yǎng)的 Atp6v0d2-/-小鼠體脂比與野生型接近模型小鼠喂養(yǎng)至第 12 周稱量體重（A），測(cè)量小鼠腰圍（B）與體長（C）后，斷頸處死小鼠，解剖剝離肝臟、各主要白色脂肪部分稱重，計(jì)算其與體重之比（D）。圖 3. Atp6v0d2-/-小鼠血脂水平與野生型接近

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本文編號(hào)：2722368