【摘要】：組蛋白去乙�；�(Histone deacetylases,HDACs)能夠通過(guò)影響翻譯后修飾,調(diào)節(jié)多種生物過(guò)程。有研究表明,組蛋白去乙�；敢种苿�(Histone deacetylase inhibitor,HDACi)能夠誘導(dǎo)部分腫瘤細(xì)胞凋亡,其作用機(jī)制也得到了廣泛的研究。但對(duì)于同為炎癥相關(guān)疾病的Ⅰ型糖尿病,較少有人探究HDACi是否通過(guò)抑制Ⅰ型糖尿病的炎癥反應(yīng),保護(hù)胰島β細(xì)胞。有研究證明三種炎癥因子IL-1β,TNF-α,IFN-γ,均與Ⅰ型糖尿病相關(guān)。因此,本文提出假設(shè),HDACi能否抑制三種炎癥因子混合物誘導(dǎo)的大鼠胰島β細(xì)胞INS-1細(xì)胞株的凋亡。本研究選取了三種炎癥因子混合物IL-1β,TNF-α,IFN-γ,用不同濃度的炎癥因子混合物處理細(xì)胞24h,結(jié)果表明炎癥因子混合物能夠抑制INS-1細(xì)胞的活力,并誘導(dǎo)其凋亡。并確定了炎癥因子混合物處理時(shí)間為24h,后續(xù)實(shí)驗(yàn)濃度為IL-1β(10ng/ml),TNF-α(12.5ng/ml),IFN-γ(25ng/ml)。而后選取8種HDACi,通過(guò)MTT實(shí)驗(yàn)、流式細(xì)胞術(shù)和Western blot實(shí)驗(yàn)探究8種HDACi能否保護(hù)INS-1細(xì)胞,增加細(xì)胞活力,減少炎癥因子誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡,減少凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)。將HDACi的保護(hù)時(shí)間設(shè)為0h、2h、4h、6h,結(jié)果表明HDACi預(yù)處理時(shí)間越長(zhǎng)保護(hù)效果越明顯,細(xì)胞活力越高,凋亡數(shù)量越少,凋亡蛋白表達(dá)量越低。并從其中篩選出了保護(hù)效果最好的HDACi:M344。最后,提取M344預(yù)處理6h組(炎癥因子混合物處理時(shí)間為0h、2h、8h、16h、24h)、炎癥因子Cot組(炎癥因子混合物處理時(shí)間相同)的RNA,進(jìn)行基因芯片分析。首先比較了炎癥因子混合物處理0h和24h的基因表達(dá)差異,獲得2550個(gè)差異基因,并將差異基因富集到Wiki通路中,結(jié)果表明炎癥因子混合物能夠上調(diào)多種凋亡相關(guān)基因的表達(dá),并阻滯細(xì)胞周期。之后比較了炎癥因子混合物處理細(xì)胞時(shí)間相同時(shí)有無(wú)M344保護(hù)作用能否引起基因表達(dá)的差異,結(jié)果發(fā)現(xiàn)與Cot組相比,在各個(gè)時(shí)間點(diǎn),M344均能抑制大量凋亡相關(guān)基因的表達(dá),同時(shí)能夠抑制部分免疫相關(guān)基因的表達(dá),但細(xì)胞周期相關(guān)基因的表達(dá)并沒(méi)有出現(xiàn)明顯變化。綜上所述,本文驗(yàn)證了三種炎癥因子混合物能夠誘導(dǎo)INS-1細(xì)胞凋亡,并篩選出了一種能夠抑制炎癥因子作用,保護(hù)INS-1細(xì)胞的HDACi:M344,并明確了炎癥因子混合物能促進(jìn)細(xì)胞凋亡、阻滯細(xì)胞周期,M344能夠抑制炎癥因子誘導(dǎo)的凋亡及免疫相關(guān)基因的表達(dá),保護(hù)INS-1細(xì)胞。
【圖文】：

東北師范大學(xué)碩士學(xué)位論文干 EP 管，，加入 20μL DEPC 水溶解樣品，檢測(cè) RNA 濃度，-80℃保存。（八）基因芯片數(shù)據(jù)分析1. Expression Console (EC)EC 軟件用于將 CEL 格式的原始芯片數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為 CHP 格式，以及檢測(cè)芯片質(zhì)量是否符合標(biāo)準(zhǔn)。提前下載好庫(kù)文件和注釋文件。由于本實(shí)驗(yàn)使用大鼠 INS-1 細(xì)胞，選擇芯片類(lèi)型為 RTA1.0(Rat TranscriptomeArray 1.0)。打開(kāi)原始數(shù)據(jù)，進(jìn)行背景處理和數(shù)據(jù)匯總。格式轉(zhuǎn)換成功后，進(jìn)行芯片質(zhì)量檢測(cè)，運(yùn)行界面如圖 1 所示。

圖 2 Transcriptome Analysis Console 的運(yùn)行界面展示Fig 2 .The exhibition of Transcriptome Analysis Console in action（九）統(tǒng)計(jì)學(xué)分析本文采用 T 檢驗(yàn)方法進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，當(dāng) 0.01＜P＜0.05 時(shí)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)在統(tǒng)計(jì)學(xué)上具有顯著性差異；當(dāng) P＜0.01 時(shí)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)在統(tǒng)計(jì)學(xué)上具有極顯著差異，進(jìn)行 T檢驗(yàn)的所有實(shí)驗(yàn)至少重復(fù) 3 次。
【學(xué)位授予單位】：東北師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R587.1

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 姚根宏;欒建鳳;;內(nèi)皮祖細(xì)胞生物學(xué)特性及其臨床應(yīng)用研究進(jìn)展[J];中國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志;2008年06期

2 朱琳;周智廣;楊文;楊竹林;張松;;完全弗氏佐劑抑制NOD鼠胰島β細(xì)胞凋亡及其機(jī)制[J];中南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2006年06期

3 Kang-Beom Kwon;Eun-Kyung Kim;Eun-Sil Jeong;Young-Hoon Lee;Young-Rae Lee;Jin-Woo Park;Do-Gon Ryu;Byung-Hyun Park;;Cortex cinnamomi extract prevents streptozotocin- and cytokine-induced β-cell damage by inhibiting NF-κB[J];World Journal of Gastroenterology;2006年27期

本文編號(hào)：2695497