【摘要】：糖尿病神經(jīng)痛(diabetic neuropathic pain,DNP)是糖尿病常見的慢性并發(fā)癥,對患者的生活質(zhì)量造成嚴重影響。脊髓是軀體感覺信息整合的關(guān)鍵部位,研究顯示表達于脊髓背角的超極化激活環(huán)核苷酸門控(hyperpolarization-activated cyclic nucleotide-gated,HCN)通道及鉀氯聯(lián)合轉(zhuǎn)運蛋白2(K~+-Cl~-cotransporter 2,KCC2)參與了病理性疼痛的發(fā)生、發(fā)展。其中,HCN4通道大量表達于背角膠狀質(zhì)抑制性中間神經(jīng)元,KCC2亦高表達于脊髓膠狀質(zhì)神經(jīng)元,糖尿病神經(jīng)痛時HCN4通道激活所誘發(fā)的K~+外流是否調(diào)節(jié)KCC2功能,繼而影響背角抑制性中間神經(jīng)元γ-氨基丁酸(GABA)的釋放及痛敏,均有待闡明。本課題通過制作大鼠糖尿病神經(jīng)性疼痛模型,觀察:1)脊髓背角HCN4通道在糖尿病神經(jīng)痛中的作用;2)KCC2是否參與HCN4通道對糖尿病神經(jīng)痛大鼠的鎮(zhèn)痛作用。本課題探討脊髓背角HCN4通道在糖尿病神經(jīng)痛發(fā)生中的作用及機制,為開發(fā)以HCN4通道為靶點的新型鎮(zhèn)痛藥提供理論基礎(chǔ)。目的:1.觀察脊髓背角HCN4通道在糖尿病神經(jīng)痛中的作用。2.觀察KCC2是否參與HCN4通道對糖尿病神經(jīng)痛大鼠的鎮(zhèn)痛作用。方法:1.4~5周齡SD大鼠隨機分為3組(n=12):(1)對照組;(2)STZ組(鞘內(nèi)給予生理鹽水);(3)ZD7288+STZ組(鞘內(nèi)給予HCN通道拮抗劑ZD7288)。單次腹腔注射60 mg/kg鏈脲佐菌素(STZ)制備大鼠糖尿病模型,注射STZ 2 w后鞘內(nèi)給予HCN通道拮抗劑ZD7288。分別于造模前及造模后14、21、28 d測定大鼠空腹血糖和體重;行為學檢測機械縮足閾值(mechanical withdrawal threshold,MWT)及熱縮足反射潛伏期(thermal withdrawal latency,TWL);免疫印跡技術(shù)檢測大鼠脊髓背角HCN4通道、谷氨酸脫羧酶65(glutamate decarboxylase 65,GAD65)及KCC2蛋白的表達;鄰苯二甲醛柱前衍生高效液相色譜法檢測大鼠脊髓背角GABA含量。2.4~5周齡SD大鼠隨機分為5組(n=12):(1)對照組;(2)STZ組(鞘內(nèi)給予生理鹽水);(3)ZD7288+STZ組(鞘內(nèi)給予HCN通道拮抗劑ZD7288);(4)DIOA+STZ組(鞘內(nèi)給予KCC2抑制劑DIOA);(5)DIOA+ZD7288+STZ組(先鞘內(nèi)給予DIOA,10 min后再給予ZD7288)。單次腹腔注射60 mg/kg STZ制備大鼠糖尿病模型,注射STZ 2 w后鞘內(nèi)給予HCN通道拮抗劑ZD7288及KCC2抑制劑DIOA。測定各組大鼠MWT及TWL值,免疫印跡技術(shù)檢測大鼠脊髓背角HCN4通道蛋白的表達。結(jié)果:1.與對照組相比,糖尿病大鼠體重明顯減輕(P0.01),空腹血糖值明顯升高(P0.01),鞘內(nèi)注射HCN通道拮抗劑ZD7288對糖尿病大鼠體重和空腹血糖無顯著影響(P0.05);大鼠腹腔注射STZ 2 w后MWT、TWL明顯縮短,產(chǎn)生糖尿病神經(jīng)痛,鞘內(nèi)給予ZD7288可顯著延長糖尿病大鼠的MWT、TWL(P0.01);糖尿病大鼠脊髓背角HCN4通道蛋白表達顯著增高(P0.01)、KCC2蛋白表達降低(P0.01)、GAD65表達無顯著變化(P0.05),鞘內(nèi)注射HCN通道拮抗劑ZD7288可顯著降低糖尿病大鼠脊髓背角HCN4表達、升高KCC2表達(P0.01);糖尿病大鼠脊髓背角GABA含量顯著增加(P0.05),鞘內(nèi)給予ZD7288可顯著降低背角GABA含量(P0.05)。2.鞘內(nèi)給予KCC2抑制劑DIOA可顯著降低糖尿病大鼠的MWT、TWL,促進DNP的發(fā)生、發(fā)展(P0.01)。此外,預先鞘內(nèi)給予KCC2抑制劑DIOA可顯著抑制HCN通道拮抗劑ZD7288的鎮(zhèn)痛效應(yīng)(P0.01),并且可顯著升高糖尿病大鼠脊髓背角HCN4通道的表達(P0.01)。結(jié)論:1.脊髓背角HCN4通道表達增加促進了糖尿病神經(jīng)痛的發(fā)生、發(fā)展。2.HCN4通道在糖尿病神經(jīng)痛中的作用可能與其抑制糖尿病大鼠脊髓背角神經(jīng)元KCC2表達所致的“GABA向興奮性轉(zhuǎn)化”密切相關(guān)。
【圖文】：

圖1 HPLC色譜圖A.空白液；B.GABA對照品；C.組織樣品液（1為GABA峰）Fig.1 The HPLC chromatogramA. Blank solution; B. GABA reference substance; C. Tissue sample solution（5）標準曲線的制備精密吸取GABA對照品儲備液，加入三蒸水稀釋成GABA終質(zhì)量濃度分別為10、15、25、50、100 μg/mL的系列溶液，衍生化處理后按“1.2.7（1）”項色譜條件分別進樣檢測，以GABA的峰面積（y）為縱坐標，質(zhì)量濃度（x）為橫坐標繪制標準曲線，得標準曲線y = 13.166x + 3.5073（r=0.9997），見圖 2。表明GABA在10 ~ 100 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積線性良好。

圖1 HPLC色譜圖白液；B.GABA對照品；C.組織樣品液（1為GABA峰Fig.1 The HPLC chromatogramsolution; B. GABA reference substance; C. Tissue sampl備對照品儲備液，加入三蒸水稀釋成GABA終質(zhì)/mL的系列溶液，衍生化處理后按“1.2.7（1）的峰面積（y）為縱坐標，質(zhì)量濃度（x）為橫坐6x + 3.5073（r=0.9997），見圖 2。表明GABA良好。
【學位授予單位】：遵義醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R587.2

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 崔存德;;刺激藍斑對脊髓背角痛敏單位放電的影響[J];濱州醫(yī)學院學報;1987年03期

2 方宗仁;李麗娜;;電針鎮(zhèn)痛和脊髓P物質(zhì)的關(guān)系[J];中國針灸;1988年01期

3 王希濤;吳景蘭;;電針及納洛酮阻斷電針鎮(zhèn)痛對豚鼠腎上腺和脊髓腦啡肽樣物質(zhì)影響的免疫組化觀察[J];針刺研究;1988年03期

4 劉慶瑩;朱長庚;劉漢濤;盧金活;;脊髓背角5-羥色胺纖維的來源和超微結(jié)構(gòu)分布——HRP與免疫細胞化學結(jié)合法研究和免疫電鏡觀察[J];解剖學報;1988年04期

5 吳葆孫;江豚(Neophocaena phocaenoides)脊髓的研究[J];獸類學報;1989年01期

6 周敬修;黃登凱;李寬[M;田啟;陸世鐸;笪翠娣;盧毓青;;向脊髓下行性投射的細胞起源[J];針刺研究;1989年Z1期

7 施靜;艾民康;關(guān)新民;;電針對脊髓背角內(nèi)ACh代謝的影響[J];針刺研究;1989年Z1期

8 崔存德;張虹;張慧;邱承海;;脊髓背角單位放電的記錄及其計算機處理方法[J];濱州醫(yī)學院學報;1989年02期

9 張?zhí)煜?張建身;牛漢璋;;脊髓背角會聚神經(jīng)元與痛覺的調(diào)制[J];濱州醫(yī)學院學報;1989年04期

10 王嘉琪;王圣明;嚴育東;孔牧;羅世城;楊靜;戴春秋;楊雁靈;王亞云;;脊髓背角Ⅰ-Ⅲ層疼痛神經(jīng)環(huán)路的研究進展[J];神經(jīng)解剖學雜志;2017年04期

相關(guān)會議論文 前10條

1 李云慶;馮宇鵬;;神經(jīng)加壓素在脊髓背角參與鎮(zhèn)痛的機制[A];中國解剖學會2012年年會論文文摘匯編[C];2012年

2 胡能偉;楊紅衛(wèi);胡曉東;張紅梅;張彤;劉先國;;脊髓背角C~-纖維誘發(fā)電位LTP表達機制的初步研究[A];中國生理學會第21屆全國代表大會暨學術(shù)會議論文摘要匯編[C];2002年

3 吳江;上官守琴;胡祁生;;嗎啡減弱電刺激誘發(fā)大鼠脊髓背角長時程電位[A];湖北省生理學會2007年度年會暨學術(shù)報告會論文集[C];2007年

4 信文君;劉先國;胡能偉;楊紅衛(wèi);周利君;張彤;;離子型谷氨酸受體在脊髓背角LTP誘導和維持中的作用[A];中南地區(qū)第六屆生理學學術(shù)會議論文摘要匯編[C];2004年

5 張紅梅;胡能偉;楊紅衛(wèi);劉先國;;脊髓背角C-纖維誘發(fā)電位LTP的產(chǎn)生和維持機制的研究[A];中國生理學會張錫鈞基金會第八屆全國青年優(yōu)秀生理學學術(shù)論文綜合摘要[C];2003年

6 胡曉東;劉先國;張紅梅;楊紅衛(wèi);周利君;張彤;;抑制酪氨酸蛋白激酶可減弱切斷坐骨神經(jīng)大鼠脊髓背角A纖維誘發(fā)的興奮性突觸后電流[A];中南地區(qū)第六屆生理學學術(shù)會議論文摘要匯編[C];2004年

7 李云慶;張華;郭軍;吳利平;王文;;中腦導水管周圍灰質(zhì)-延髓吻段腹側(cè)區(qū)-脊髓背角間接神經(jīng)加壓素能通路的形態(tài)學證明[A];中國解剖學會2011年年會論文文摘匯編[C];2011年

8 劉風雨;邢國剛;徐Ym;韓濟生;萬有;;5-羥色胺受體亞型調(diào)節(jié)大鼠脊髓背角廣動力范圍神經(jīng)元C串放電的研究[A];中華醫(yī)學會疼痛學分會第六屆年會論文摘要[C];2005年

9 宮慶娟;陳金生;黃喬東;盧振和;越宇;;膠質(zhì)細胞在ATP誘導的脊髓背角LTP中的作用[A];中華醫(yī)學會疼痛學分會第十屆學術(shù)年會論文集[C];2013年

10 周利君;鐘yN;任文杰;劉先國;;BDNF對脊髓背角C-纖維誘發(fā)電位的影響及其機制的探討[A];中國生理學會張錫鈞基金會第十屆全國青年優(yōu)秀生理學學術(shù)論文綜合摘要[C];2009年

相關(guān)博士學位論文 前10條

1 劉燕妮;Spinophilin定位的突觸PP1對脊髓背角MEK/ERK信號通路的負性調(diào)控作用[D];蘭州大學;2017年

2 袁維秀;氯胺酮治療慢性神經(jīng)源性疼痛作用機制的實驗研究[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進修學院;2004年

3 張習春;脊髓痛覺可塑性的一氧化氮信號通路[D];復旦大學;2005年

4 何農(nóng);N-甲基-D-天門冬氨酸[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學;2002年

5 徐峰;大鼠脊髓NMDA受體NR2B參與炎性痛的機理研究[D];蘇州大學;2006年

6 梁U，

本文編號：2680410