【摘要】：目的:以高尿酸血癥小鼠模型為基礎,探討在高尿酸環(huán)境下小鼠腎臟中鋅α2糖蛋白(zinc alpha 2 glycoprotein,ZAG)的變化,另外通過構建尿酸細胞模型,觀察在尿酸環(huán)境下HK-2細胞中ZAG蛋白的變化,為高尿酸血癥相關代謝性疾病的研究提供新思路。方法:1)將60只SPF級昆明種小鼠隨機分為模型組和空白對照組,97%氧嗪酸鉀鹽按0.5g/(kg·d)腹腔注射,尿酸酶抑制法建立高尿酸血癥小鼠模型,造模7d及14d后,尾靜脈采血檢測血清尿酸(SUA)水平確定模型建立成功及檢測小鼠血清生化指標,利用Western Blotting及實時熒光定量PCR技術檢測ZAG mRNA及ZAG表達;2)以含10%胎牛血清的1640為培養(yǎng)基,在37℃培養(yǎng)箱(5%CO_2)內復蘇并傳代HK-2細胞株。實驗主要分為以下幾個部分:(1)探討人腎小管上皮細胞在同一濃度尿酸刺激下鋅-ɑ2-糖蛋白(ZAG)的動態(tài)表達變化:實驗分為空白對照組、不同濃度尿酸模型組,分別為10mg/dl、21mg/dl、26mg/dl。分別于加入干預因素后24h、48h、72h,用Western Blotting法檢測鋅-ɑ2-糖蛋白(ZAG)表達變化。結果:(1)在7天時間節(jié)點上,空白組ZAG低于模型組ZAG蛋白,差異有顯著性統(tǒng)計學意義(P0.05)。14天模型組空白組ZAG灰度高于模型組ZAG蛋白灰度。且7天及14天小鼠腎臟組織ZAG mRNA高于空白組,差異有極顯著性統(tǒng)計學意義(P0.001)。表明腎臟分泌ZAG,尿酸可以引起ZAG蛋白的改變。(2)在不同尿酸0.1mg/ml、0.21mg/ml、0.26mg/ml誘導24h、48h、72h,用Western Blotting法ZAG濃度與空白組相比灰度均無變化。結論:1)通過HUA模型小鼠與空白小鼠ZAG條帶灰度值對比,發(fā)現(xiàn)尿酸小鼠模型腎臟較空白組相比可影響ZAG變化,RT-PCR結果也表明高尿酸腎臟ZAG mRNA水平高于空白小鼠ZAG mRNA,表明腎臟細胞分泌ZAG。同時在7天模型小鼠中ZAG表達上高且ZAG mRNA表達上升,且脂代謝代謝紊亂,尤以甘油三酯下降明顯,表明尿酸可能通過影響甘油三酯的代謝引起ZAG蛋白的變化。而14天模型組HUA模型小鼠與空白小鼠ZAG條帶灰度值對比,發(fā)現(xiàn)尿酸小鼠模型腎臟的ZAG是降下的,但ZAG mRNA則是上升趨勢,另外考慮尿酸同時有抗氧化和促氧化作用,通過上述文獻整理,促氧化可導致炎癥因子的產生,故在7天與14天蛋白表達呈現(xiàn)出相反的。2)另外細胞實驗顯示不同濃度尿酸干預不同時間下,HK-2細胞中ZAG均未有變化,由于細胞不同于動物,且誘導時間有限,故ZAG表達水平并沒有變化。3)尿酸可能是通過其他途徑使得鋅-α2-糖蛋白(ZAG)發(fā)生改變。
【圖文】：

β-actin 蛋白 （~43KD）注：a.空白組；bc 模型組 β-actin 蛋白為內參圖 2-1 7 天及 14 天 ZAG 蛋白在空白組與模型組腎臟中的表達表達圖Figure 2-1:7 days and 14 days of ZAG protein expression in the kidneys of the blank group and thegroup2.4 熒光定量 PCR 法驗證引物采用實時熒光定量 PCR 法檢測小鼠 ZAG m RNA 的表達情況，根據各個樣的溶解曲線，小鼠 ZAG 的溶解曲線和內參溶解曲線，無雜峰，引物與模板特異良好，無非特異性擴增產物。HUA 組的峰可與對照組的峰分開，說明 PCR 反應適，擴增目標特異性良好。ZAG 溶解曲線約在（83±0.5）℃，呈現(xiàn)單峰；內參線約在（87±0.5）℃，呈現(xiàn)單峰。取 5μl PCR 擴增產物，通過瓊脂糖凝膠電泳驗證驗證結果可見 150bp 和 100bp 左右有明顯單一條帶。ZAG

圖 2-3 ZAG 蛋白與內參 GAPDH 的凝膠圖Figure 2-3 ZAG gel protein and reference GAPDHNA 表達情況比較鼠腎臟組織與空白組 ZAGmRNA 表達水平比較差組 ZAGmRNA 高于空白組。（表 2-5）型組與空白組腎臟組織 ZAGmRNA 表達水平比較（n=1 of the expression level of ZAGmRNAin the renal tissue of tblank group（n=10,x±s）分組 例數(shù)（只） ZAGmRNA空白組 10 1.00±0.00模型組 10 1.20±0.22T 值 -8.727P 值 <0.05
【學位授予單位】：右江民族醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R589.7

【參考文獻】

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本文編號：2647835