【摘要】：目的:齊墩果酸對腫瘤壞死因子-α(TNF-α)誘導(dǎo)的人成纖維細(xì)胞樣滑膜細(xì)胞(Human fibroblast-like synoviocytes,HFLS)炎癥因子表達(dá)的影響及其可能的分子機(jī)制,為齊墩果酸在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎中的應(yīng)用提供理論依據(jù)。方法:1、體外培養(yǎng)并傳代人成纖維細(xì)胞樣滑膜細(xì)胞。2、實(shí)驗(yàn)方法:四甲基偶氮唑鹽微量酶反應(yīng)比色法(MTT)檢測HFLS活性,western blot蛋白檢測法檢測細(xì)胞p38MAPK及NF-κB p65的表達(dá),RT-PCR檢測白介素-6(Interleukin 6,IL-6)和白介素1β(Interleukin 1β,IL-1β)的表達(dá),ELISA法檢測HFLS上清液中IL-6和IL-1β的生成。3、實(shí)驗(yàn)分組:根據(jù)研究目的將實(shí)驗(yàn)分為3部分:(1)檢測齊墩果酸對基礎(chǔ)狀態(tài)下HFLS的影響,將細(xì)胞分為6組:對照組及不同濃度齊墩果酸組(5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L);(2)檢測齊墩果酸對TNF-α誘導(dǎo)的HFLS炎癥因子表達(dá)的影響,分為5組:對照組,TNF-α組及TNF-α+不同濃度齊墩果酸組(5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L);(3)檢測p38MAPK及NF-κB的蛋白表達(dá)變化,將細(xì)胞分為5組:對照組,TNF-α組,TNF-α+不同濃度齊墩果酸組(5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L);(4)檢測p38MAPK及NF-κB阻斷劑對HFLS上清液中炎癥因子生成的影響,分為5組:對照組,TNF-α組,TNF-α+齊墩果酸(20μmol/L)組,TNF-α+p38MAPK阻斷劑組,TNF-α+NF-κB阻斷劑組。結(jié)果:1、5μmol/L-20μmol/L的齊墩果酸對基礎(chǔ)狀態(tài)的HFLS的活性無明顯影響(P0.05)。當(dāng)濃度大于40μmol/L后,齊墩果酸明顯抑制細(xì)胞活性(P0.05)。2、與對照組比較,TNF-α明顯促進(jìn)IL-6及IL-1β的mRNA表達(dá),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3、與TNF-α組比較,不同濃度齊墩果酸對TNF-α誘導(dǎo)的IL-6及IL-1β的mRNA表達(dá)均有抑制作用,并呈濃度依賴性(P0.05)。4、與對照組比較,TNF-α能促進(jìn)p38MAPK的磷酸化,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與TNF-α組比較,齊墩果酸能抑制TNF-α誘導(dǎo)的p38MAPK磷酸化(P0.05),且呈濃度依賴性。5、與對照組比較,TNF-α能促進(jìn)NF-κB核蛋白的表達(dá),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與TNF-α組比較,齊墩果酸能抑制TNF-α誘導(dǎo)的NF-κB核蛋白的表達(dá)(P0.05)。6、加入p38MAPK阻斷劑SB203580和NF-κB抑制劑Bay11-7082后,與TNF-α組比較,IL-6及IL-1β的生成明顯減少(P0.05)。結(jié)論:1、TNF-α能促進(jìn)HFLS細(xì)胞IL-6及IL-1β的表達(dá)和分泌,并促進(jìn)p38MAPK的磷酸化及NF-κB核轉(zhuǎn)位。2、齊墩果酸能抑制TNF-α誘導(dǎo)的HFLS炎癥因子的表達(dá)(IL-6及IL-1β),并抑制TNF-α誘導(dǎo)p38MAPK的磷酸化及NF-κB核轉(zhuǎn)位。3、齊墩果酸通過抑制p38MAPK及NF-κB信號(hào)通路,從而抑制HFLS細(xì)胞炎癥因子的表達(dá)。
【圖文】：

西 南 醫(yī) 科 大 學(xué) 碩 士 學(xué) 位 論 文養(yǎng)及傳代文獻(xiàn)進(jìn)行細(xì)胞的復(fù)蘇及傳代[4]，，簡單敘述如下浴箱中進(jìn)行約 1min 的解凍后，放入超凈工作，放入到事先準(zhǔn)備好的培養(yǎng)皿中，并加入完全養(yǎng)皿放入二氧化碳孵箱中。第二天將細(xì)胞取出長，為細(xì)胞換液后，此后每隔 2 天換液 1 次。，進(jìn)行細(xì)胞傳代。

人成纖維細(xì)胞樣滑膜細(xì)胞（光鏡×100倍）
【學(xué)位授予單位】：西南醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R593.22

【參考文獻(xiàn)】

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1 陳思穎;龔國清;;IKK/NF-κB通路在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎中的作用及相關(guān)藥物研究進(jìn)展[J];藥學(xué)研究;2016年06期

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7 劉德芳;郭明陽;呼永河;晏姣;王超;

本文編號(hào)：2518309