發(fā)布時間：2017-09-29 07:27

  本文關(guān)鍵詞：含人干細胞白血病基因的重組慢病毒表達載體的構(gòu)建及鑒定

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【摘要】：目的構(gòu)建含人干細胞白血病(SCL)基因的重組慢病毒表達載體(GV287-SCL),為糖尿病膀胱異常病癥(DCP)的基因治療奠定基礎(chǔ)。方法采用PCR法將人SCL基因質(zhì)粒內(nèi)的遺傳物質(zhì)擴增,與慢性病毒穿透質(zhì)粒結(jié)合,構(gòu)建重組穿梭質(zhì)粒GV287-EGFP/SCL,共轉(zhuǎn)染293T細胞,通過多次感染、擴增和提純,得到重組慢病毒GV287-SCL。以不同濃度重組慢病毒原液感染293T細胞,采用Western blotting法檢測目的基因,熒光標記法計算病毒滴度。結(jié)果人SCL基因擴增產(chǎn)物大小為1 036 bp,與目的基因相關(guān)片段中SCL c DNA大小相同。陽性轉(zhuǎn)化子擴展后均形成503 bp條帶,其大小與目的片段人SCL c DNA相當(dāng)。重組質(zhì)粒GV287-EGFP/SCL陽性克隆的目的基因SCL成功插入到GV287-EGFP,基因排序和Gen Bank信息庫里的人SCL基因mRNA基本相同。重組慢病毒滴度為5×108TU/m L。結(jié)論成功構(gòu)建了GV287-SCL,病毒滴度為5×108TU/m L。本研究為繼續(xù)進行SCL基因體內(nèi)轉(zhuǎn)染及開展DCP的基因治療提供了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院;石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院;
【關(guān)鍵詞】： 糖尿病膀胱異常病癥 干細胞白血病基因 慢病毒載體 轉(zhuǎn)染 Cajal樣間質(zhì)細胞
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項目(81360120)
【分類號】：R587.2;R694
【正文快照】： 糖尿病膀胱異常病癥(DCP)為糖尿病末期常見的并發(fā)癥之一,發(fā)生率為19%~84%;其臨床表現(xiàn)為遺尿、尿不凈等,末期會出現(xiàn)尿路感染、腎炎等,最終發(fā)展成尿毒癥,發(fā)生機制目前尚不明確[1]。近年研究發(fā)現(xiàn),膀胱逼尿肌會出現(xiàn)自發(fā)性收縮,此收縮完全受到Cajal樣細胞的調(diào)節(jié)[2]。DCP患者受高血

【參考文獻】

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【相似文獻】

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本文編號：940723