本文關鍵詞：人臍帶間充質(zhì)干細胞對高糖致足細胞凋亡的作用

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【摘要】：背景：糖尿病腎病(DN)是糖尿病常見的慢性微血管并發(fā)癥,隨糖尿病發(fā)病率升高,DN已成為終末期腎病(ESRD)的主要病因。研究表明,在DN的發(fā)生和發(fā)展中,足細胞凋亡與蛋白尿的產(chǎn)生密切相關,改善和維持足細胞的正常結(jié)構和功能可以改善糖尿病腎損傷。臨床上DN的治療以降低血糖、控制血壓和減少蛋白尿等對癥治療及腎臟替代治療為主,目前尚無令人滿意的治療方法。間充質(zhì)干細胞(MSCs)具有亞全能分化潛能,廣泛用于多種疾病的治療,也為DN的治療提供了新方向。研究證明,MSCs移植可以降低糖尿病大鼠血糖,減少蛋白尿,改善腎損傷,但其具體機制仍不明確。我們采用高糖刺激足細胞建立凋亡模型,通過MSCs和足細胞共培養(yǎng)探討MSCs對足細胞凋亡的影響及其作用機制。目的：探討人臍帶間充質(zhì)干細胞(HUC-MSCs)對高糖誘導的足細胞凋亡的影響及其作用機制。方法：采用貼壁法制備人臍帶間充質(zhì)干細胞,對獲取的HUC-MSCs通過細胞形態(tài)觀察,多向分化(成骨誘導分化和成脂誘導分化),流式細胞儀檢測細胞表型進行鑒定。小鼠足細胞分為4組：(1)正常糖組(NG)；(2)高糖組(HG)；(3)甘露醇滲透壓對照組(NG+MA);(4)HUC-MSCs和足細胞transwell共培養(yǎng)組(HUC-MSCs)。分別刺激72h后,檢測足細胞凋亡指標,包括蛋白印跡法檢測凋亡相關蛋白PARR、Bcl-2的表達,采用流式細胞術檢測足細胞凋亡率,Hoechst染色檢測足細胞凋亡水平。酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)法檢測HUC-MSCs分泌HGF水平。同時,采用HGF抗體中和HGF以消除其作用,或加入rhHGF模擬MSC作用,探討HGF在HUC-MSCs抗凋亡機制中的作用。結(jié)果：1.制備培養(yǎng)的HUC-MSCs呈長梭形,平行或漩渦狀排列；油紅O染色發(fā)現(xiàn)細胞漿有染成紅色的油滴空泡；茜素紅染色發(fā)現(xiàn)細胞漿中有染成酒紅色的鈣沉積；流式細胞術檢測HUC-MSCs高表達常用的人間充質(zhì)干細胞標記CD90(98.5%),CD105(64.3%),CD73(96.3%)；不表達造血細胞標記CD34(0.3%),CD45(0.5%)。2.高糖刺激24、48、72h后,足細胞PARP的表達增多,且隨刺激時間延長而持續(xù)增高。各實驗組處理72h后,檢測凋亡相關指標。免疫印跡法顯示：與NG組比較,HG組凋亡標志蛋白PARP的表達增多、Bcl-2表達減少(P0.05),與HG組比較,HUC-MSCs共培養(yǎng)組PARP的表達減少、Bcl-2表達增加(P0.05)。流式細胞術顯示：與NG組比較,HG組足細胞凋亡率增多(P0.05)；與HG組比較,HUC-MSCs共培養(yǎng)組足細胞凋亡率減少(P0.05)。Hoechst染色顯示：HG組足細胞細胞核出現(xiàn)花瓣狀或固縮變小,呈現(xiàn)典型凋亡形態(tài)；HUC-MSCs共培養(yǎng)組細胞核形態(tài)正常,呈長橢圓形,無凋亡細胞核改變。與NG組比較,HG組足細胞凋亡率增多(P0.05)；與HG組比較,HUC-MSCs共培養(yǎng)組足細胞凋亡率減少(P0.05)。NG+Ma組無上述凋亡指標的改變。3. ELISA檢測HUC-MSCs分泌大量HGF。加入rhHGF后,與高糖組比較,rhHGF組PARP的表達減少、Bcl-2表達增加(P0.05),足細胞凋亡率減少(P0.05),細胞核形態(tài)正常,呈長橢圓形,無凋亡細胞核改變。與HUC-MSCs組比較,加入HGF中和抗體后PARP的表達增多,Bcl-2表達減少(P0.05)足細胞凋亡率增多(P0.05),足細胞細胞核出現(xiàn)花瓣狀或固縮變小,呈現(xiàn)典型凋亡形態(tài)。結(jié)論：1. HUC-MSCs可以減輕高糖誘導的足細胞凋亡。2. HUC-MSCs對高糖誘導足細胞凋亡的保護作用可能與分泌HGF有關。
【關鍵詞】：糖尿病腎病 間充質(zhì)干細胞 足細胞 凋亡
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R587.2;R692.9
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• Abstract8-10
• 符號說明10-12
• 前言12-14
• 材料與方法14-23
• 結(jié)果23-25
• 討論25-30
• 結(jié)論30-31
• 附圖表31-38
• 參考文獻38-42
• 綜述42-52
• 參考文獻48-52
• 致謝52-53
• 攻讀學位期間發(fā)表的學術論文53-54
• 學位論文評閱及答辯情況表54

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本文編號：729653