發(fā)布時間：2017-08-06 22:16

  本文關鍵詞：穩(wěn)定敲低SIGIRR的人腎小管上皮細胞的構建及其初步功能的研究

  更多相關文章： 狼瘡性腎炎 人腎小管上皮細胞 SIGIRR 慢病毒載體 NF-κB 趨化因子

【摘要】：目的建立穩(wěn)定敲低單免疫球蛋白白介素1相關受體(SIGIRR)基因的人腎小管上皮細胞株(HKC),并初步研究其功能。方法針對SIGIRR基因的有效靶點設計shRNA序列,與GV248-GFP-Puro慢病毒載體連接產(chǎn)生重組體(GV248-GFP-Puro-sh SIGIRR)。將測序驗證正確的重組體與包裝質(zhì)粒(p MDL、pRev、p VSVG)共轉(zhuǎn)染293T細胞進行病毒包裝,收集病毒并感染HKC細胞。實時熒光定量PCR(qRTPCR)和Western blot法分析檢測HKC細胞中SIGIRR干涉效率。應用白細胞介素-1β(IL-1β)刺激成功敲低SIGIRR的HKC細胞及對照細胞,Western blot法檢測其下游核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB(p65)的磷酸化水平,qRT-PCR分析單核細胞趨化蛋白-1(MCP-1)、正常T細胞表達和分泌的活化調(diào)節(jié)蛋白(RANTES)mRNA水平。結(jié)果成功構建重組慢病毒載體GV248-GFP-Puro-sh SIGIRR。qRT-PCR和Western blot法均證實在HKC細胞中成功敲低SIGIRR的表達。此外,IL-1β刺激后,與對照細胞相比,敲低SIGIRR的HKC細胞(HKC/sh SIGIRR)的p65磷酸化水平上調(diào),MCP-1和RANTES mRNA表達水平升高。結(jié)論 HKC的炎癥反應中,SIGIRR蛋白對Toll樣受體/白介素1受體(TLR/IL-1R)通路起"剎車"作用。該研究為狼瘡性腎炎的治療提供了新的潛在的靶點。
【作者單位】： 安徽醫(yī)科大學第二附屬醫(yī)院腎臟內(nèi)科;安徽醫(yī)科大學基礎醫(yī)學院生物化學與分子生物學教研室;安徽醫(yī)科大學藥學院;安徽醫(yī)科大學第一臨床學院;安徽醫(yī)科大學公共衛(wèi)生學院流行病與衛(wèi)生統(tǒng)計系;
【關鍵詞】： 狼瘡性腎炎 人腎小管上皮細胞 SIGIRR 慢病毒載體 NF-κB 趨化因子
【基金】：安徽省博士后科學基金(編號:9101019202) 中國博士后科學基金(編號:2012M511399) 國家自然科學基金(編號:81101524、81372475、81172591)
【分類號】：R593.242
【正文快照】： 2014-10-23接收狼瘡性腎炎(lupus nephritis,LN)是系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus,SLE)最常見的并發(fā)癥之一,而腎臟受累的嚴重程度對SLE患者死亡率及預期壽命有顯著影響[1-2]。但LN發(fā)病機制尚未完全明確。研究[3-7]提示LN的發(fā)生和發(fā)展與腎小管上皮細胞內(nèi)Toll樣受

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 吳學玲;張椿;趙云峰;錢桂生;;SIGIRR對LPS誘導的H292細胞TLR4表達的影響[J];西部醫(yī)學;2009年04期

2 黃勛;梁曉華;田豐;姜濤;;SIGIRR對HMGB1誘導的A549細胞炎性反應的影響[J];中國呼吸與危重監(jiān)護雜志;2011年06期

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 楊波;張志培;姜鵬;尚榮鑫;韓國梁;葛鵬;姜濤;;褪黑素對大鼠腸缺血再灌注肺損傷及N-myc下游調(diào)節(jié)基因2表達的影響[J];中國呼吸與危重監(jiān)護雜志;2013年01期

2 梁曉華;黃勛;田豐;高坤祥;王艷;李小飛;姜濤;;單免疫球蛋白白細胞介素1受體相關蛋白在脂多糖誘導的急性肺損傷小鼠肺組織中表達的研究[J];中國呼吸與危重監(jiān)護雜志;2013年06期

3 謝席勝;高薇;馮勝剛;張菊;;狼瘡腎炎的生物靶向治療[J];西部醫(yī)學;2014年11期

4 趙巍;王小平;周勇安;閆小龍;倪云峰;田豐;;單免疫球蛋白白細胞介素1受體相關蛋白對香煙煙霧提取物刺激A549細胞后產(chǎn)生效應的影響[J];中國呼吸與危重監(jiān)護雜志;2015年01期

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 張寧;TLR信號通路有關基因與系統(tǒng)性紅斑狼瘡的相關性研究[D];安徽醫(yī)科大學;2011年

【二級參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 田豐;王云杰;趙晉波;張志培;姜濤;;SIGIRR在人正常肺組織及脂多糖誘導的肺泡上皮細胞急性損傷中的表達[J];中國呼吸與危重監(jiān)護雜志;2009年03期

【相似文獻】

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 錢桂生;;SIGIRR對小鼠內(nèi)毒素性急性肺損傷的保護作用研究[A];中華醫(yī)學會呼吸病學年會——2011（第十二次全國呼吸病學學術會議）論文匯編[C];2011年

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本文編號：631695