發(fā)布時間：2021-10-10 23:33

　　目的：建立漢族人腎肉瘤樣癌細胞系，研究該細胞系的生物學(xué)特性，篩選腎肉瘤樣癌高轉(zhuǎn)移性細胞亞型；構(gòu)建腎癌噬菌體展示肽庫和腎透明細胞癌特異性噬菌體展示肽庫，進行腎細胞癌早期檢測分子標志物的篩選。方法：（1）采用1例腎肉瘤樣癌新鮮手術(shù)標本，于手術(shù)后30-60min內(nèi)用植塊法進行體外培養(yǎng)，確定腫瘤病理學(xué)特點和染色體眾數(shù)，記錄細胞系的生長曲線，集落形成率，應(yīng)用流式細胞儀檢測細胞的腫瘤干細胞表面標志物。（2）構(gòu)建腎癌噬菌體展示肽庫：收集腎癌組織標本30例和腎癌細胞系3種48瓶。利用Trizol試劑抽提總RNA，用純化試劑盒抽提mRNA，再經(jīng)過反轉(zhuǎn)錄、末端平齊化、加EcoRⅠ/HindⅢ接頭、HindⅢ和EcoRⅠ雙酶切、大小片段篩選、連接載體臂、噬菌體體外包裝等一系列反應(yīng)，成功構(gòu)建了腎癌噬菌體展示肽庫。（3）腎癌特異性的噬菌體的富集：用正常對照和腎癌患者的血清進行五輪正負向親和篩選，以富集可以和腎癌患者血清中自身抗體相結(jié)合的特異性噬菌體單克隆。（4）腎癌特異性噬菌體的篩選：五輪正負向篩選后，隨機挑選了的2000個噬菌體單克隆，用ELISA法進行初篩。結(jié)果：（1）腫瘤組織樣本免疫組化結(jié)果顯示：Vime... 

【文章來源】：中國人民解放軍海軍軍醫(yī)大學(xué)上海市 211工程院校

【文章頁數(shù)】：75 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞表
前言
第一部分 腎肉瘤樣細胞癌細胞系的建立
    一、材料
    二、方法
    三、結(jié)果
    四、討論
第二部分 腎癌噬菌體展示肽庫的構(gòu)建
    一、材料
    二、方法
    三、結(jié)果
    四、討論
總結(jié)
參考文獻
綜述
    參考文獻
碩士期間研究成果
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
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[3]噬菌體展示肽庫篩選大腸癌早期檢測分子標志群[D]. 曹付傲.第二軍醫(yī)大學(xué) 2010
[4]人原代腎細胞癌轉(zhuǎn)移性和非轉(zhuǎn)移性細胞的體內(nèi)外篩選[D]. 譚曉（豐刀女）.第二軍醫(yī)大學(xué) 2005



本文編號：3429360