【摘要】：目的：1、觀察組織因子途徑抑制物-2 (tissue factor pathway inhibitor-2, TFPI-2)對(duì)人前列腺癌細(xì)胞侵襲能力和遷移能力影響；2、通過(guò)形態(tài)學(xué)水平及分子水平,探討TFPI-2對(duì)人前列腺癌細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)的影響。方法：1、傳代培養(yǎng)人前列腺癌細(xì)胞株P(guān)C3M,選取生長(zhǎng)穩(wěn)定的3～8代細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)；2、將選取的細(xì)胞隨機(jī)分為3組,分別轉(zhuǎn)染TFPI-2基因真核表達(dá)載體(轉(zhuǎn)染組)、空載體(轉(zhuǎn)染空載體組)及不轉(zhuǎn)染(未轉(zhuǎn)染組)；3、細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)3組細(xì)胞的遷移能力；4、細(xì)胞侵襲小室實(shí)驗(yàn)檢測(cè)它們的侵襲能力；5、用轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(transforming growth factor-β1, TGF-β1)處理細(xì)胞,倒置相差顯微鏡下觀察3組細(xì)胞形態(tài)；6、Western Blot法分別檢測(cè)經(jīng)TGF-β1處理后的3組細(xì)胞EMT標(biāo)志物——E鈣黏素(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)和snail蛋白在蛋白水平上的表達(dá)量,統(tǒng)計(jì)分析相關(guān)數(shù)據(jù)；7、逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)法檢測(cè)3組細(xì)胞EMT標(biāo)志物在mRNA水平上的表達(dá)量并統(tǒng)計(jì)分析相關(guān)數(shù)據(jù)。結(jié)果：1、細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)：轉(zhuǎn)染組、轉(zhuǎn)染空載體組、未轉(zhuǎn)染組遷移率分別為(29.65±8.33)%,(55.45±10.07)%,(54.06±11.29)%,經(jīng)方差分析,3組遷移率不全相等,轉(zhuǎn)染組分別與轉(zhuǎn)染空載體組、未轉(zhuǎn)染組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),但轉(zhuǎn)染空載體組、未轉(zhuǎn)染組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。說(shuō)明PC3M細(xì)胞轉(zhuǎn)染TFPI-2后遷移能力明顯降低。2、細(xì)胞侵襲小室實(shí)驗(yàn)：轉(zhuǎn)染組、轉(zhuǎn)染空載體組、未轉(zhuǎn)染組侵襲細(xì)胞數(shù)分別為(90.3±24.3),(227.1±40.5),(232.7±42.7),經(jīng)方差分析,3組侵襲細(xì)胞數(shù)不全相等,轉(zhuǎn)染組分別與轉(zhuǎn)染空載體組、未轉(zhuǎn)染組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),但轉(zhuǎn)染空載體組、未轉(zhuǎn)染組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。說(shuō)明PC3M細(xì)胞轉(zhuǎn)染TFPI-2后侵襲能力明顯受到抑制。3、倒置相差顯微鏡下觀察：轉(zhuǎn)染組細(xì)胞大多呈多角形“鋪路石樣”,細(xì)胞之間連接較緊密；轉(zhuǎn)染空載體組、未轉(zhuǎn)染組細(xì)胞大多呈梭形“間葉細(xì)胞樣”,細(xì)胞之間無(wú)明顯連接,呈散在生長(zhǎng)。4、Western Blot:以未轉(zhuǎn)染組作為對(duì)照組,轉(zhuǎn)染組E-cadherin表達(dá)較多,為對(duì)照組的(1.819±0.105)倍,vimentin和snail蛋白表達(dá)較少,分別為對(duì)照組的(0.538±0.034),(0.458±0.019)倍,與轉(zhuǎn)染空載體組、未轉(zhuǎn)染組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),但轉(zhuǎn)染空載體組、未轉(zhuǎn)染組之間比較,各蛋白表達(dá)量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。5、RT-PCR:以未轉(zhuǎn)染組作為對(duì)照組,轉(zhuǎn)染組E-cadherin mRNA表達(dá)較多,為對(duì)照組的(2.104±0.068)倍,vimentin和snail蛋白的mRNA表達(dá)較少,分別為對(duì)照組的(0.515±0.034),(0.437±0.017)倍,與轉(zhuǎn)染空載體組、未轉(zhuǎn)染組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),但轉(zhuǎn)染空載體組、未轉(zhuǎn)染組之間比較,各mRNA表達(dá)量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論TFPI-2可以抑制人前列腺癌細(xì)胞的EMT,這是其抑制前列腺癌細(xì)胞侵襲與轉(zhuǎn)移的可能機(jī)制之一,為基因及生物靶向治療前列腺癌提供新的思路和方向。
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R737.25

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本文編號(hào)：2799609