【摘要】：目的:初步探討偽基因和長鏈非編碼RNA(Long non-coding RNA,LncRNA)作為腎透明細胞癌非侵入性生物標記物的可行性。方法:結合本課題組前期研究,并在查閱相關文獻后,我們選取了8個LncRNA和10個偽基因,使用腎透明細胞癌患者和健康成年人血漿對其表達差異進行了初步檢驗,這些具體步驟包括提取血漿總RNA、反轉錄為cDNA、以及使用5sRNA為內參,進行實時熒光定量PCR檢驗等。經過初步檢驗后,我們進一步獲得了在腎透明細胞癌患者和健康成年人之間血漿中表達差異較為顯著的1個LncRNA和4個偽基因。隨后,我們采用了較大的樣本量并使用類似方法進行驗證和篩選,其中包括了55個腎透明細胞癌患者以及26位健康成年人的血漿樣本,以初步判斷其作為腎透明細胞癌診斷性非侵入性生物標記物的潛能。最后,對篩選出的LncRNA和偽基因進行了在線樣本分析,以判斷其與預后的顯著相關性,探究其作為腎癌預后非侵入性生物標記物的潛能及其影響腎癌發(fā)生、發(fā)展的可能機制。結果:對于被選出的部分LncRNA和偽基因,我們采集了腎透明細胞癌患者和健康成年人的血樣對其表達水平進行了初步檢測。結果發(fā)現(xiàn)樣本中偽基因PLEKHA8P1、CXCR2P1、KLRAP1、PDXDC2P、FER1L4和LncRNA TLX1NB、LINC00482、DIO3OS表達水平改變較為一致且較為顯著。隨后,在使用更大的樣本容量進行實時熒光定量PCR驗證后,我們發(fā)現(xiàn)偽基因CXCR2P1(RQ=2.017,p=0.016)、KLRAP1(RQ=3.152,p=0.010)、PLEKHA8P1(RQ=2.782,p=0.014)、PDXDC2P(RQ=2.625,p=0.029)以及LncRNA TLX1NB(RQ=1.904,p=0.013)在腎透明細胞癌患者血漿中的表達水平上升均較為顯著,且差異具有統(tǒng)計學意義。最后,經生物信息學分析,我們發(fā)現(xiàn)偽基因CXCR2P1、KLRAP1、PLEKHA8P1以及LncRNA TLX1NB與腎透明細胞癌患者預后相關。結論:1.成功創(chuàng)建并驗證了在血漿中提取LncRNA和偽基因,直至進行實時熒光定量PCR檢測其表達水平的體系。2.血漿偽基因CXCR2P1、KLRAP1、PLEKHA8P、PDXDC2P以及LncRNA TLX1NB可能成為腎透明細胞癌的診斷性非侵入性生物標記物。3.血漿偽基因CXCR2P1、KLRAP1、PLEKHA8P以及LncRNA TLX1NB可能成為腎透明細胞癌預后的非侵入性生物標記物。
【圖文】：

圖 1.1 實時熒光定量 PCR 擴增曲線Fig1.1 Real-time Quantitative PCR amplification curve3.3 血漿中 LncRNA 和偽基因差異表達分析我們已通過前期研究篩選出一些在腎透明細胞癌癌組織中與預后顯著相關的 LncRNA 和偽基因。而本章節(jié)研究中，我們試圖探尋腎透明細胞癌患者血漿中這些 LncRNA 和偽基因的表達與健康成年人相比是否會出現(xiàn)異常。本章節(jié)研究中，我們使用 5sRNA 為內參，初步分析了 2 位健康成年人和 2 位腎透明細胞癌血漿中部分 LncRNA 和偽基因的表達水平差異。這 10 個偽基因包括：PLEKHA8P1、OR2A9P、CXCR2P1、KLRAP1、PDXDC2P、SPACA6P、RNF216P、CFL1P1、FER1L4、PIPSL，，而 8 個 LncRNA 為 TLX1NB、LINC00482、DIO3OS、HAR1A、LINC00623、LINC001565、FAM225B、CDKN2A-AS1。在經實時熒光

22圖 1.3 腎透明細胞癌患者與健康成年人血漿中的 LncRNA 表達情況差異Fig1.3 Differences in the expression level of LncRNAs in plasma between ccRCC patientsand healthy adults（注：圖 a：DIO3OS;圖 b：LINC00482;圖 c：TLX1NB；Normal：健康成年人組；ccRCC：腎透明細胞癌患者組）
【學位授予單位】：江蘇大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R737.11

【參考文獻】

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本文編號：2670953