【摘要】：前列腺癌(Prostate Cancer)是目前全世界最常見的男性惡性腫瘤之一,在美國等發(fā)達(dá)國家癌癥致死率排名中位居第二位。我國近年來前列腺癌發(fā)病率也呈現(xiàn)逐年上升趨勢,因此,針對前列腺癌開展有效的防治措施具有重大的社會意義和經(jīng)濟(jì)效益。前列腺癌起病隱匿,生長較為緩慢,早期前列腺癌可無任何臨床癥狀。而一旦出現(xiàn)癥狀,常屬較晚期的進(jìn)展性前列腺癌,就診時多數(shù)患者已發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。前列腺癌惡性程度高,發(fā)病機(jī)制至今尚未完全明確,年齡、種族及遺傳家族史均與發(fā)病密切相關(guān)。對于早期局限性前列腺癌,綜合考慮患者年齡、腫瘤臨床分期、血清前列腺特異性抗原、格里森評分及前列腺活檢陽性標(biāo)本數(shù)量等多種因素,可以選擇主動監(jiān)測或根治性前列腺癌切除術(shù)。但如前文所述,前列腺癌起病隱匿,多數(shù)患者就診時已發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移,錯失手術(shù)根治的機(jī)會。由于86-98%的前列腺癌為雄激素依賴型腫瘤,目前針對晚期轉(zhuǎn)移性前列腺癌的經(jīng)典治療策略是雄激素剝奪療法(androgen deprivation therapy,ADT),也稱為去勢療法,但多數(shù)患者在1-2年內(nèi)對ADT發(fā)生耐藥,進(jìn)展為轉(zhuǎn)移性去勢抵抗型前列腺癌(metastatic castration-resistant prostate cancer,mCRPC)。新近研發(fā)的ADT藥物恩雜魯胺及阿比特龍可明顯改善患者生存率,被認(rèn)為是mCRPC治療方面的突破進(jìn)展,但20-40%的患者對恩雜魯胺及阿比特龍并不敏感(原發(fā)耐受),其余敏感患者最終也幾乎都會出現(xiàn)繼發(fā)耐受�；熞彩乔傲邢侔┲饕闹委煼椒ㄖ�,可以延長患者的生存時間。但化療藥物均有一定藥物毒性,身體狀態(tài)、骨髓功能或肝腎功能較差的患者通常不能耐受。免疫療法(如sipuleucel-T)為mCRPC的治療提供了新的方向,但相對嚴(yán)格的使用適應(yīng)癥和較高的經(jīng)濟(jì)成本限制其使用。目前已有大量的治療前列腺癌的新藥進(jìn)行動物實驗,甚至進(jìn)入臨床試驗階段,如卡博替尼(一種酪氨酸激酶抑制劑)。然而,這些新藥從研發(fā)到臨床還需要數(shù)年的時間。因此,尋找一種安全、有效的藥物治療方法仍然是目前前列腺癌治療中需要迫切解決的問題。非諾貝特作為一種降脂藥物,已經(jīng)廣泛應(yīng)用于臨床。其化學(xué)成分為2-甲基-2-[4-(4-氯苯甲�；�)苯氧基]丙酸異丙酯,它藥效穩(wěn)定、使用安全、價格低廉,已被臨床廣泛應(yīng)用于高膽固醇血癥和高脂血癥的治療。此外,非諾貝特還被證實具有預(yù)防糖尿病視網(wǎng)膜病變、糖尿病腎臟病變、糖尿病心肌病變,以及其他糖尿病微血管并發(fā)癥的作用。越來越多的研究證明非諾貝特在某些惡性腫瘤的發(fā)生過程中還具有抗腫瘤細(xì)胞增殖和促腫瘤細(xì)胞凋亡的作用,如乳腺癌、子宮頸癌癥、肝癌和前列腺癌。已有報道發(fā)現(xiàn)非諾貝特可通過激活氧化應(yīng)激反應(yīng),來抑制雄激素受體表達(dá)水平并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,從而發(fā)揮抑制雄激素依賴型前列腺癌細(xì)胞系LNCaP的生長的作用。目前,治療mCRPC是臨床治療前列腺癌的難點(diǎn),也是國內(nèi)外研究熱點(diǎn)。因此,本論文主要探討非諾貝特是否能夠抑制雄激素非依賴型前列腺癌PC-3細(xì)胞(可模擬臨床mCRPC)生長及相關(guān)分子機(jī)制,并通過動物實驗進(jìn)一步驗證。本論文所得到的結(jié)果如下:(1)MTT法測定PC-3細(xì)胞在不同濃度的非諾貝特作用24、48和72 h的增殖情況。結(jié)果顯示,非諾貝特明顯抑制PC-3細(xì)胞的生長,且這種抑制作用呈時間依賴性和劑量依賴性。(2)應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)分析非諾貝特引起的細(xì)胞凋亡情況。結(jié)果顯示,非諾貝特處理24、48及72 h的凋亡細(xì)胞總百分比分別為8.5±1.87%,12.63±2.59%和25.53±7.77%,較對照組3.83±0.64%明顯升高。進(jìn)一步檢測細(xì)胞凋亡的兩個重要指標(biāo)caspase 3和AIF。結(jié)果顯示,非諾貝特處理24小時后明顯增加了cleaved caspase 3和AIF的表達(dá)。上述結(jié)果說明非諾貝特抑制PC-3細(xì)胞生長主要是通過激活caspase3和AIF從而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡實現(xiàn)的。(3)非諾貝特處理PC-3細(xì)胞后,Bad表達(dá)升高,Bcl-2和Survivin表達(dá)降低。說明非諾貝特通過提高Bad的表達(dá),降低Bcl-2和survivin的表達(dá),誘導(dǎo)PC-3細(xì)胞凋亡。(4)非諾貝特處理PC-3細(xì)胞0.5-24 h,p-mTOR/mTOR和p-p70S6K/p70S6K比值明顯下降。100nM雷帕霉素(mTOR抑制劑)處理后,非諾貝特的抗增殖作用與雷帕霉素相同,且雷帕霉素能夠進(jìn)一步提高非諾貝特的抗增殖能力。說明抑制mTOR的磷酸化可以抑制PC-3細(xì)胞增殖,非諾貝特抑制PC-3細(xì)胞增殖是通過抑制mTOR/p70S6K細(xì)胞通路實現(xiàn)的。(5)非諾貝特處理PC-3細(xì)胞后沒有激活PI3K,但作用0.5 h及48 h時p-AKT/AKT比值升高。非諾貝特處理0.5 h至48 h時p-P38/P38比值增加,但對JNK表達(dá)沒有影響。非諾貝特處理0.5 h至3 h時p-AMPKα/AMPKα比值明顯降低,但作用24h時p-AMPKα/AMPKα比值明顯升高。上述結(jié)果說明非諾貝特對mTOR/p70S6K通路的抑制作用不通過PI3K/AKT及JNK通路,可能與增加P38 MAPK和AMPKα磷酸化有關(guān)。(6)10μM SB203580(P38 MAPK抑制劑)沒有消除非諾貝特對PC-3細(xì)胞的生長抑制作用,反而明顯提高了非諾貝特的抗增殖能力。同樣,5μM Compound C(AMPK抑制劑)也沒有消除非諾貝特對PC-3細(xì)胞的生長抑制作用,反而明顯提高了非諾貝特的抗增殖能力。說明非諾貝特對mTOR/p70S6K通路的抑制作用不通過P38 MAPK和AMPKα通路,但抑制P38 MAPK和AMPK明顯增加了非諾貝特對PC-3細(xì)胞的生長抑制作用。(7)將2×10~6/0.1ml的PC-3細(xì)胞懸液接種于裸鼠背部皮下,構(gòu)建前列腺癌裸鼠皮下移植瘤模型。當(dāng)腫瘤體積達(dá)到100mm~3時,將裸鼠分組進(jìn)行實驗。非諾貝特溶液200mg/kg每日1次灌胃3周后,藥物組腫瘤體積、腫瘤重量及腫瘤重量/體重比值較對照組明顯下降,但兩組裸鼠體重未見明顯差異,說明非諾貝特對移植瘤有抑制作用,且未見明顯副作用。本論文得出了如下的結(jié)論:(1)非諾貝特抑制PC-3細(xì)胞的生長,且這種抑制作用呈時間依賴性和劑量依賴性;(2)非諾貝特抑制PC-3細(xì)胞生長主要是通過抑制mTOR/p70S6K細(xì)胞通路來誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡實現(xiàn)的。非諾貝特抑制mTOR磷酸化,繼而減少P70S6K激活,引起B(yǎng)ad表達(dá)增多與Bcl-2表達(dá)降低,通過線粒體途徑激活caspase3并增加AIF釋放,最終誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。P70S6K激活減少同時引起survivin表達(dá)量降低,caspase3激活增加,誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡;(3)非諾貝特對mTOR/p70S6K通路的抑制作用不通過PI3K/AKT、MAPKs和AMPK通路,但抑制P38 MAPK和AMPK明顯增加了非諾貝特對PC-3細(xì)胞的生長抑制作用;(4)非諾貝特對前列腺癌裸鼠皮下移植瘤具有抑制作用,且未見明顯副作用。
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R737.25

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本文編號：2619132