【摘要】：目的:既往個(gè)別研究探討了腎臟交感神經(jīng)與腎臟缺血再灌注損傷的相互聯(lián)系,但結(jié)果不一,有待進(jìn)一步研究證實(shí)。本研究擬建立去腎交感神經(jīng)大鼠模型,研究去腎交感神經(jīng)對(duì)腎臟缺血再灌注損傷的作用,并初步探討對(duì)心臟的影響。方法:選擇雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠(體重200-280g)為研究對(duì)象,分為正常組(N組)、假手術(shù)組(Sham組)、去腎交感神經(jīng)組(renal sympathetic denervation group,RSD組)、缺血再灌注組(ischemia-reperfusion group,I/R組)、去腎交感神經(jīng)+缺血再灌注組(R+I組),其中RSD組根據(jù)去腎交感神經(jīng)后時(shí)間點(diǎn)分為24小時(shí)組(R1組)、48小時(shí)組(R2組)和72小時(shí)組(R3組)。Sham組僅分離腎臟血管,RSD組分離雙腎動(dòng)靜脈后用無(wú)菌棉紗蘸溶于10%苯酚無(wú)水乙醇溶液包裹雙腎動(dòng)脈20分鐘,I/R組分離雙腎動(dòng)靜脈后用無(wú)創(chuàng)動(dòng)脈夾夾閉雙腎動(dòng)脈45分鐘后松開,R+I組則根據(jù)R1組、R2組和R3組的去甲腎上腺素水平判斷去腎交感神經(jīng)成功后時(shí)間再開始I/R。除N組直接開腹留取動(dòng)物標(biāo)本外,其余組均在術(shù)后24小時(shí)留取動(dòng)物標(biāo)本進(jìn)行分子生物學(xué)及組織學(xué)研究。(1)通過(guò)全自動(dòng)生化儀測(cè)定血肌酐、尿素氮、胱抑素c水平,elisa法測(cè)定血漿中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白(neutrophilgelatinase-associatedlipocalin,ngal),以及腎臟he染色以判斷腎臟功能及損傷狀況;通過(guò)全自動(dòng)生化儀測(cè)定血漿的肌酸激酶同工酶mb(creatinekinaseisoenzymemb,ck-mb)以及he染色了解心肌的損傷程度。(2)高效液相色譜法(highperformanceliquidchromatography,hplc)測(cè)定腎臟和心臟組織的去甲腎上腺素濃度以判斷去腎交感神經(jīng)是否成功及各組交感神經(jīng)的興奮狀態(tài)。(3)通過(guò)western-blot檢測(cè)腎臟和心臟組織的nf-e2相關(guān)因子2(nuclearfactorerythroid2-relatedfactor2,nrf2)和血紅素加氧酶1(hemeoxygenase-1,ho-1)的表達(dá)水平,并通過(guò)測(cè)定組織的丙二醛(mda)和超氧化物氣化酶(superoxidegasificationenzyme,sod)濃度以了解氧化應(yīng)激水平。(4)通過(guò)western-blot檢測(cè)腎臟和心臟組織的微管相關(guān)蛋白1輕鏈3(microtubule-associatedprotein1lightchain3,lc3)和beclin1表達(dá),了解自噬狀態(tài)。通過(guò)免疫組織化學(xué)和western-blot檢測(cè)腎臟和心臟組織的caspase3表達(dá)及tunel法以明確對(duì)組織的凋亡程度的影響。結(jié)果:根據(jù)hplc測(cè)定腎臟的去甲腎上腺素水平,以去腎交感神經(jīng)后24小時(shí)開始i/r。與i/r組相比,r+i組的肌酐、尿素氮、胱抑素c、血漿ngal和ck-mb升高(p0.05)。腎臟he染色可見皮髓質(zhì)交界處腎小管細(xì)胞變性、崩解和脫離,管腔擴(kuò)張明顯,腎間質(zhì)水腫。心肌he染色可見心肌排列紊亂,間隙增寬,可見斷裂。r+i組氧化應(yīng)激增強(qiáng),腎臟和心臟組織的mda升高,sod下降,nrf2及其下游的ho-1的表達(dá)增強(qiáng)(p0.05)。r+i組自噬水平下降,lc3和beclin1的表達(dá)較i/r組減少,caspase3的表達(dá)及tunel陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)增加(p0.05)。我們通過(guò)hplc測(cè)定出i/r組和r+i組腎臟及心肌組織的去甲腎上腺素水平相對(duì)于sham組明顯升高,并且r+i組高于i/r組(p0.05)。結(jié)論:本研究通過(guò)建立去腎交感神經(jīng)大鼠模型,從臟器功能、氧化應(yīng)激狀態(tài)、自噬和凋亡的水平多方面研究了去腎交感神經(jīng)對(duì)腎臟缺血再灌注后腎臟和心臟的作用。我們發(fā)現(xiàn)去腎交感神經(jīng)合并腎臟缺血后加重了腎臟缺血再灌注損傷以及遠(yuǎn)隔部位心臟的影響。考慮原因?yàn)?(1)通過(guò)化學(xué)消融達(dá)到部分去腎交感神經(jīng)的效果不足以抵抗腎臟缺血再灌注所致交感神經(jīng)活性的增強(qiáng);(2)本研究為確定去腎交感神經(jīng)起效的最佳時(shí)機(jī),測(cè)定了去腎交感神經(jīng)24小時(shí)、48小時(shí)和72小時(shí)的去甲腎上腺素水平,擬定了24小時(shí)為最佳時(shí)機(jī),但也因此導(dǎo)致去腎交感神經(jīng)+腎臟缺血再灌注出現(xiàn)二次開腹的情況,可能導(dǎo)致氧化應(yīng)激損傷加重進(jìn)一步影響心腎功能。(3)去腎交感神經(jīng)后是否會(huì)有殘存的腎交感神經(jīng),以及其他的代償機(jī)制或全身交感神經(jīng)反饋機(jī)制導(dǎo)致腎臟缺血再灌注后局部和遠(yuǎn)隔器官的損害加重尚不清楚。目前去腎交感神經(jīng)對(duì)腎臟缺血再灌注的研究較少,現(xiàn)有的研究在模型建立、缺血時(shí)間、再灌注時(shí)間監(jiān)測(cè)上均存在差異,導(dǎo)致結(jié)果參差不齊,還有必要對(duì)此問(wèn)題進(jìn)行深入研究。
【圖文】：

圖 1：大鼠去腎交感神經(jīng)模型建立的示意圖Figure 1：Diagram of renal sympathetic denervation model in rat2.3.2 大鼠腎臟缺血再灌注模型建立

圖 2：大鼠腎臟缺血再灌注模型建立的示意圖Figure 2：Diagram of renal ischemia-reperfusion model in rat2.3.3 去腎交感神經(jīng)+腎臟缺血再灌注組模型建立
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R692

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本文編號(hào)：2523487