【摘要】：目的通過流式微球載體技術(shù)檢測體外淋巴細(xì)胞刺激上清液白細(xì)胞介素2(IL-2)和IL-6水平,探索預(yù)測移植腎急性排斥反應(yīng)的方法。方法 52例腎移植受者(急性排斥反應(yīng)組22例和腎功能穩(wěn)定組30例)的外周血淋巴細(xì)胞經(jīng)佛波酯和離子霉素體外刺激8 h,應(yīng)用流式微球載體技術(shù)檢測培養(yǎng)液上清中的IL-2和IL-6的含量。比較刺激后上清液與未經(jīng)刺激的血漿中IL-2和IL-6表達(dá)水平及其預(yù)測急性排斥反應(yīng)的能力。結(jié)果經(jīng)刺激后的急性排斥反應(yīng)組IL-2和IL-6的水平均顯著高于腎功能穩(wěn)定組,各組淋巴細(xì)胞刺激上清液IL-2和IL-6水平顯著高于相應(yīng)未刺激的患者血漿中的水平;刺激后,IL-2和IL-6聯(lián)合預(yù)測排斥反應(yīng)的靈敏度和特異度分別為81.8%和90%,均大于各自單獨(dú)預(yù)測排斥反應(yīng)的靈敏度和特異度。結(jié)論建立了流式微球載體技術(shù)檢測體外淋巴細(xì)胞培養(yǎng)液IL-2、IL-6的方法,兩者聯(lián)合起來預(yù)測移植腎急性排斥反應(yīng)具有良好的靈敏度和特異度。
【圖文】：

欏２捎檬蓯哉吖ぷ魈卣?receiveroperatingcharacteristic，ＲOC)曲線來評價IL-2聯(lián)合IL-6預(yù)測腎移植術(shù)后急性排斥反應(yīng)的價值。P＜0．05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2結(jié)果2．1IL-2和IL-6在刺激后各組淋巴細(xì)胞培養(yǎng)液上清中的水平顯著高于相應(yīng)未經(jīng)刺激血漿的水平腎移植受者的外周血淋巴細(xì)胞經(jīng)過10ng/mLPMA、1μg/mL離子霉素刺激8h后，收集培養(yǎng)上清液，應(yīng)用流式微載體技術(shù)進(jìn)行上清液IL-2和IL-6表達(dá)水平的檢測。AＲ組IL-2熒光強(qiáng)度為77．11±38．00，STA組水平為36．25±27．25，AＲ組水平顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．01，圖1)。AＲ組IL-6相對熒光強(qiáng)度為252．48±98．81，STA組為122．19±87．79，AＲ組IL-6也顯著增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．01，圖1)。1:陰性對照血清;2:健康人的血清;3:AＲ組患者血清;4:STA組患者血清;5:設(shè)門;6:只加微球;7:只加二抗及PE．圖1淋巴細(xì)胞培養(yǎng)上清液的IL-2和IL-6流式微球載體技術(shù)檢測圖將淋巴細(xì)胞刺激實(shí)驗(yàn)同一患者未經(jīng)刺激的血漿(在進(jìn)行淋巴細(xì)胞刺激前留取同一患者的血漿)應(yīng)用流式微球載體技術(shù)檢測IL-2、IL-6的表達(dá)強(qiáng)度。未經(jīng)刺激的血漿IL-2熒光強(qiáng)度值在AＲ組為15．98±12．91，STA組為11．06±7．75，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0．093)。但未經(jīng)刺激的AＲ組患者血漿IL-6熒光強(qiáng)度為37．26±25．27，STA組為21．48±17．66，顯著高于STA組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．05)。刺激后STA組及AＲ組的細(xì)胞培養(yǎng)液上清IL-2、IL-6熒光強(qiáng)度值均分別顯著高于相應(yīng)未刺激的患者血漿的熒光強(qiáng)度值(P＜0．01)。在STA組，刺激后細(xì)胞培養(yǎng)液上清IL-2、IL-6的水平是未經(jīng)刺激的血漿中IL-2、IL-6水平的3．28倍及5．69倍。在AＲ組刺激后上清液IL-2、IL-6的水平是未經(jīng)刺激的血漿中IL-2、IL-6水平的4．83倍及6．78倍。2．2刺激后IL-

性排斥反應(yīng)ＲOC曲線比較;B:刺激后與未刺激的IL-6預(yù)測急性排斥反應(yīng)ＲOC曲線比較．圖2刺激后與未刺激的IL-2和IL-6預(yù)測急性排斥反應(yīng)ＲOC曲線比較2．3刺激后IL-6聯(lián)合IL-2提高預(yù)測急性排斥反應(yīng)的能力將刺激后IL-2和IL-6這兩個指標(biāo)聯(lián)合建立二元logistic回歸模型，試圖提高預(yù)測排斥反應(yīng)的能力。經(jīng)過比較ＲOC曲線分析聯(lián)合指標(biāo)二元logistic回歸模型預(yù)測排斥反應(yīng)的AUC(圖3)，我們發(fā)現(xiàn)IL-6聯(lián)合IL-2預(yù)測排斥反應(yīng)的AUC最大(0．903)，，聯(lián)合后的靈敏度和特異度分別為81．8%和90%，均大于各自單獨(dú)預(yù)測排斥反應(yīng)的靈敏度和特異度。圖3IL-6聯(lián)合IL-2與其各自單獨(dú)預(yù)測排斥反應(yīng)ＲOC曲線比較3討論體液中的細(xì)胞因子是所有免疫和炎癥反應(yīng)的誘導(dǎo)和效應(yīng)階段的關(guān)鍵介質(zhì)［10－11］。因此，越來越多的研究試圖在體液中尋找生物標(biāo)志分子［12－14］。目前已經(jīng)確定IL-2［15－16］和IL-6在細(xì)胞介導(dǎo)的排斥反應(yīng)中具有重要作用，過多的IL-6、效應(yīng)T細(xì)胞的激活與調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的抑制有關(guān)［17－18］。本研究目的是在體外刺激腎移植受者的外周血淋巴細(xì)胞，通過流式微球載體技術(shù)檢測細(xì)胞培養(yǎng)液中IL-2和IL-6表達(dá)的差異，來預(yù)測急性排斥反應(yīng)。目前傳統(tǒng)的免疫監(jiān)測方法是直接采集患者的血液或者尿液進(jìn)行指標(biāo)的檢測。由于患者外周血的免疫細(xì)胞和分子受到免疫抑制劑的抑制，表達(dá)水平降低，致使腎功能正�；颊吆图毙耘懦饣颊唧w液的免疫標(biāo)志分子表達(dá)量的差距較小，這種小的差距導(dǎo)致被檢測指標(biāo)診斷或預(yù)測急性排斥反應(yīng)的敏感度與特異度偏低［7］。本研究中同一患者未經(jīng)刺激的血漿的IL-2、IL-6的表達(dá)強(qiáng)度顯著低于刺激后的上清液的水平。未經(jīng)刺激IL-2預(yù)測急性排斥反應(yīng)的ＲOC曲線評價無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。盡管未經(jīng)刺激IL-6預(yù)測急性排斥反應(yīng)的ＲOC曲線評價有統(tǒng)計(jì)學(xué)?
【作者單位】： 陜西省人民醫(yī)院骨科;西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院腎臟病醫(yī)院腎移植科;陜西省人民醫(yī)院陜西省臨床檢驗(yàn)中心;陜西省人民醫(yī)院泌尿外科;陜西省人民醫(yī)院輸血科;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81670681) 高等學(xué)校博士學(xué)科點(diǎn)專項(xiàng)科研基金(20130201110059)
【分類號】：R699.2

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本文編號：2518773