【摘要】：目的:應用基于氣相色譜聯(lián)用質(zhì)譜(GC-MS)的代謝組學技術研究小鼠睪丸支持細胞氧化應激損傷機制。方法:以過氧化氫(H_2O_2)干預小鼠睪丸支持細胞TM4細胞,建立氧化損傷細胞病理模型。分別采用MTT方法檢測存活率,流式細胞儀分析細胞凋亡率,熒光分光光度計檢測細胞內(nèi)活性氧(ROS)水平;同時通過GCMS檢測H_2O_2干預后各組細胞內(nèi)源性代謝物的指紋圖譜。結(jié)果:成功建立H_2O_2損傷模型,600μmol/L H_2O_2干預2 h后細胞存活率降至50%左右;低(100μmol/L)、中(300μmol/L)和高(600μmol/L)H_2O_2劑量組總凋亡率分別為(19.45±0.53)%、(20.12±0.58)%和(37.13±0.35)%,均顯著高于不加H_2O_2的空白對照組[(10.28±0.35)%,P均0.05];中、高H_2O_2劑量組ROS水平[(1.27±0.10)%、(2.07±0.09)%]也顯著高于對照組[(1.00±0.08)%,P0.05、P0.01];代謝組學結(jié)果顯示:與對照組相比,高劑量組細胞內(nèi)氨基酸類、糖類等代謝水平均出現(xiàn)明顯變化,其中纈氨酸、正纈氨酸、亮氨酸、谷氨酸、阿拉伯糖、果糖、5-羥色胺和膽固醇等在內(nèi)的15種代謝物差異顯著(VIP1,P0.05)。結(jié)論:睪丸支持細胞在H_2O_2干預后產(chǎn)生的損傷或凋亡與細胞內(nèi)的氨基酸代謝、糖代謝和能量代謝密切相關。
[Abstract]:Aim: to study the mechanism of oxidative stress in mouse testicular Sertoli cells by gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS). Methods: TM4 cells of mouse testicular Sertoli cells were treated with hydrogen peroxide (H_2O_2), and the pathological model of oxidative injury cells was established. The survival rate was detected by MTT, the apoptosis rate was analyzed by flow cytometry, and the level of reactive oxygen species (ROS) was detected by fluorescence spectrophotometer. At the same time, GCMS was used to detect the fingerprint of endogenous metabolites in each group after H_2O_2 intervention. Results: the H_2O_2 injury model was successfully established, and the cell survival rate decreased to about 50% after the treatment of 600 渭 mol/L H_2O_2 for 2 h. The total apoptotic rates were (19.45 鹵0.53)%, (20.12 鹵0.58)% and (37.13 鹵0.35)% in low (100 渭 mol/L), middle (300 渭 mol/L) and high (600 渭 mol/L) H_2O_2 groups, respectively. It was significantly higher than the control group without H_2O_2 [(10.28 鹵0.35)%, P 0.05]. The level of ROS in the high H_2O_2 group [(1.27 鹵0.10)%, (2.07 鹵0.09)%] was significantly higher than that in the control group [(1.00 鹵0.08)%, P 0.05 P0.01]. Compared with the control group, the metabolic levels of amino acids and carbohydrates in high dose groups were significantly changed, including valine, orthvaline, leucine, glutamic acid, arabinose, fructose, etc. There were significant differences (VIP1,P0.05) in 15 metabolites including serotonin and cholesterol. Conclusion: the injury or apoptosis of testicular Sertoli cells after H_2O_2 intervention is closely related to the metabolism of amino acids, glucose and energy.
【作者單位】： 南京工業(yè)大學藥學院;南京大學醫(yī)學院附屬金陵醫(yī)院/南京軍區(qū)南京總醫(yī)院男科;
【基金】：國家自然科學基金(81373478,81370750) 2015年江蘇高校優(yōu)秀科技創(chuàng)新團隊計劃~~
【分類號】：R698.2

【參考文獻】

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【共引文獻】

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本文編號：2345013