本文選題：RNA結(jié)合蛋白QKI + RASA1　； 參考：《新疆醫(yī)科大學(xué)》2016年博士論文

【摘要】：目的:1)探討RNA結(jié)合蛋白QKI-5在腎透明細胞癌中的生物學(xué)功能;2)探索引發(fā)QKI-5發(fā)揮生物學(xué)功能的潛在分子機制及其相關(guān)信號通路。方法:1)q PCR和western blot檢測QKI-5在腎透明細胞癌組織和配對的癌旁非腫瘤組織中的表達差異,并利用TCGA數(shù)據(jù)庫中腎透明細胞癌患者臨床資料分析QKI-5表達水平的高低和腎透明細胞癌患者的臨床特征及預(yù)后的關(guān)系;2)應(yīng)用以慢病毒為載體的過表達技術(shù)觀察過表達QKI-5,體內(nèi)及體外實驗觀察對腎癌細胞增殖作用的影響,以及對細胞周期的影響;3)在上述功能變化的基礎(chǔ)上,進一步探索RNA結(jié)合蛋白QKI-5發(fā)揮上述作用的可能分子機制。結(jié)果:1)QKI-5的mRNA表達水平在腎透明細胞癌組織中較其對應(yīng)的癌旁組織中明顯下調(diào),同時在腎癌細胞系中的表達也較永生化腎小管正常上皮細胞的表達水平降低;TCGA數(shù)據(jù)庫資料分析顯示QKI-5低表達的患者的T分期更晚,病理分級更高,QKI-5低表達的患者生存率明顯差于QKI-5高表達的患者。2)過表達QKI-5能夠抑制腎癌細胞株786-0和A-498細胞體外的增殖能力、克隆形成能力以及在裸鼠體內(nèi)的生長能力;流式細胞術(shù)結(jié)果顯示,過表達QKI-5使786-0和A-498細胞產(chǎn)生G1期阻滯,而這種阻滯與周期相關(guān)蛋白cyclin D1表達降低及p21,p27表達增高有關(guān);3)RT-PCR和Western Blot結(jié)果顯示,過表達QKI-5可以增加RASA1 mRNA穩(wěn)定性的表達,促進RASA1的表達,提示QKI-5對RASA1是存在正性調(diào)節(jié)的,并且在組織標(biāo)本中驗證了QKI-5的表達與RASA1的表達呈正相關(guān)。進一步的細胞增殖實驗驗證QKI-5通過直接穩(wěn)定RASA1的mRNA表達,從而抑制RAS/MAPK/ERK信號通路發(fā)揮其抑癌基因的功能。同時采用RNA免疫共沉淀實驗確認了QKI-5可通過結(jié)合于RASA1的mRNA的3’UTR對其進行正性調(diào)控。結(jié)論:通過本課題的研究,我們發(fā)現(xiàn)QKI-5在腎透明細胞癌腫瘤組織中表達下調(diào),并且QKI-5的表達水平隨腫瘤體積的增大而降低,隨腫瘤病理分級的增加而降低,與患者的生存期呈正相關(guān)。體外實驗及體內(nèi)實驗發(fā)現(xiàn)QKI-5在腎透明細胞癌中發(fā)揮著抑癌基因的功能,可以使細胞周期阻滯在G1期,進一步的細胞實驗初步闡明了QKI-5通過對RASA1的轉(zhuǎn)錄后調(diào)控抑制RAS/MAPK/ERK信號通路發(fā)揮其抑癌基因的功能,本研究結(jié)果加深了我們對QKI-5在腎透明細胞癌中的生物學(xué)功能的認識,而且很可能為日后腎透明細胞癌的治療提供一個新的治療靶點。
[Abstract]:Objective: to investigate the biological function of RNA binding protein QKI-5 in renal clear cell carcinoma (RCC). Methods PCR and western blot were used to detect the expression of QKI-5 in renal clear cell carcinoma (RCC) and matched non-cancerous tissues. The clinical data of patients with renal clear cell carcinoma in TCGA database were used to analyze the relationship between the level of QKI-5 expression and the clinical characteristics and prognosis of patients with renal clear cell carcinoma. The effect of QKI-5 on the proliferation of renal cell carcinoma cells was observed in vivo and in vitro. On the basis of the above functional changes, the possible molecular mechanism of RNA binding protein QKI-5 was further explored. Results the expression level of mRNA in the cell carcinoma of renal clear cell was significantly lower than that in the adjacent tissues of renal clear cell carcinoma, and the expression of QKI-5 was significantly decreased in the renal clear cell carcinoma tissues than in the corresponding adjacent tissues. At the same time, the expression of TCGA in renal carcinoma cell line was lower than that in immortalized renal tubular normal epithelial cells. The analysis of TCGA database showed that the T stage of patients with low expression of QKI-5 was later than that of immortalized renal tubular normal epithelial cells. The survival rate of patients with lower expression of QKI-5 was significantly lower than that of patients with high expression of QKI-5. The overexpression of QKI-5 could inhibit the proliferation, clone formation and growth in nude mice of 786-0 and A-498 cell lines in vitro. Flow cytometry showed that overexpression of QKI-5 resulted in G1 phase arrest in 786-0 and A-498 cells, which was related to the decrease of cyclin D1 expression and the increase of p21 p27 expression. Overexpression of QKI-5 can increase the expression of RASA1 mRNA stability and promote the expression of RASA1, suggesting that QKI-5 has positive regulation on RASA1, and the expression of QKI-5 is positively correlated with the expression of RASA1 in tissue samples. Further cell proliferation experiments demonstrated that QKI-5 inhibits the function of tumor suppressor gene by directly stabilizing the mRNA expression of RASA1 and thus inhibiting the RAS/MAPK/ERK signaling pathway. At the same time, RNA immunoprecipitation assay was used to confirm that QKI-5 can be positively regulated by the 3'UTR of mRNA bound to RASA1. Conclusion: through this study, we found that the expression of QKI-5 was down-regulated in renal clear cell carcinoma, and the expression of QKI-5 decreased with the increase of tumor volume and pathological grade. There was a positive correlation with the survival time of the patients. In vitro and in vivo experiments, it was found that QKI-5 plays a role as a tumor suppressor gene in renal clear cell carcinoma and can block cell cycle in G1 phase. Further cell experiments have preliminarily clarified the role of QKI-5 in tumor suppressor genes through posttranscriptional regulation of RASA1 and inhibition of RAS/MAPK/ERK signaling pathway. The results of this study have deepened our understanding of the biological function of QKI-5 in renal clear cell carcinoma. It is also likely to provide a new therapeutic target for the future treatment of renal clear cell carcinoma.
【學(xué)位授予單位】：新疆醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R737.11

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本文編號：1847056