本文關(guān)鍵詞：血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）對(duì)caspase-3表達(dá)的影響及梗死區(qū)缺氧損傷的心肌細(xì)胞保護(hù)的機(jī)制研究

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【摘要】：背景及目的:冠心病是一種發(fā)病率、死亡率和致殘率極高的常見病和多發(fā)病,嚴(yán)重威脅人類健康,已成為嚴(yán)重的社會(huì)公共衛(wèi)生問題之一。心肌缺血發(fā)生時(shí),能夠及時(shí)、有效地恢復(fù)缺血心肌的血流灌注,是減少缺血心肌損傷和恢復(fù)心臟功能的重要措施之一,也是改善缺血性心臟病患者預(yù)后的關(guān)鍵。但大量基礎(chǔ)和臨床研究[1,2]證實(shí),缺血心肌的再灌注本身也會(huì)誘發(fā)一系列新的病理生理變化,進(jìn)一步加重心肌組織細(xì)胞的損傷,出現(xiàn)再灌注心律失常、心肌舒縮功能障礙、代謝異常以及心肌超微結(jié)構(gòu)改變等,即發(fā)生心肌缺血再灌注損傷(myocardial ischemia reperfusion injury,MIRI),直接影響患者的心臟功能和預(yù)后。心肌缺血再灌注(ischemic reperfusion,I/R)損傷是極其復(fù)雜的病理生理過程,主要是缺氧器官在恢復(fù)血流和氧輸送的情況下心肌損傷加劇的現(xiàn)象[3]。觀察缺血-再灌注小鼠6小時(shí)后,HIF-1及VEGF的表達(dá),誘導(dǎo)缺氧心肌細(xì)胞后給予生理鹽水、VEGF、VEGF阻斷劑,檢測(cè)HIF1a、VEGF、cleaved-caspase-3、PLB、Ca MK-II、SERCA2a、Bcl-2的表達(dá);探討VEGF對(duì)缺氧心肌細(xì)胞保護(hù)的可能機(jī)制。方法:1.選取同批次清潔級(jí)雄性健康昆明小鼠,開胸結(jié)扎小鼠左冠狀動(dòng)脈前降支,構(gòu)建急性心肌梗死經(jīng)典模型;應(yīng)用免疫組化技術(shù)檢測(cè)HIF1a、caspase-3在細(xì)胞內(nèi)分布的變化,在用熒光定量PCR技術(shù)分析正常小鼠心肌組織及梗死邊緣區(qū)心肌組織HIF1a、caspase-3的表達(dá)量的變化。2.用CoCl2誘導(dǎo)心肌細(xì)胞缺氧模型,用蛋白印跡法檢測(cè)缺氧心肌細(xì)胞HIF1a、VEGF及caspase-3蛋白水平。使用熒光定量PCR技術(shù)分析缺氧心肌細(xì)胞HIF1a、VEGF及caspase-3表達(dá)量的變化。3.分別給三組缺氧心肌細(xì)胞注射共計(jì)100μl的0.9%的生理鹽水、添加VEGF阻斷劑AEE788至終濃度10u M和100ng/ml VEGF;應(yīng)用蛋白印跡法方法分別分析三組缺氧心肌細(xì)胞6小時(shí)后Bcl-2、cleaved-caspase-3、SERCA2a、PLB及Ca MK-II蛋白水平;使用熒光定量PCR技術(shù)分析三組缺氧心肌細(xì)胞Bcl-2、cleaved-caspase-3、SERCA2a、PLB及Ca MK-II的表達(dá)水平。4.采用熒光指示劑Fura-2 AM方法進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)鈣離子的測(cè)定,對(duì)肌漿網(wǎng)攝鈣能力進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果:1.急性心肌梗死模型:采用前胸結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支構(gòu)建小鼠急性心肌梗死。實(shí)驗(yàn)中常見的死亡原因有:出血、麻醉不當(dāng)、肺損傷、神經(jīng)損傷、氣道阻塞、感染、心律失常等。2.缺氧心肌細(xì)胞模型:采用濃度為50uM的CoCl2誘導(dǎo)缺氧心肌細(xì)胞模型,免疫組化顯示:缺氧心肌細(xì)胞內(nèi)HIF1a、caspase-3的分布明顯異常,熒光定量PCR技術(shù)分析顯示:HIF1a、caspase-3的表達(dá)明顯升高。3.缺氧心肌細(xì)胞:應(yīng)用蛋白印跡法方法顯示HIF1a、VEGF、cleaved-caspase-3、SERCA2a、PLB及Ca MK-II的蛋白水平較正常心肌細(xì)胞明顯升高,熒光定量PCR技術(shù)分析HIF1a、VEGF、cleaved-caspase-3、SERCA2a、PLB及Ca MK-II的表達(dá)水平較正常心肌細(xì)胞也明顯升高。4.缺氧心肌細(xì)胞、缺氧+VEGF、缺氧+AEE 788:應(yīng)用蛋白印跡法方法顯示缺氧+VEGF組的HIF1a、VEGF、cleaved-caspase-3、SERCA2a、PLB及Ca MK-II的蛋白水平最高,缺氧+AEE 788組的以上蛋白水平最低。熒光定量PCR技術(shù)分析以上蛋白的表達(dá)水平有相似的結(jié)果。5.用熒光指示劑Fura-2 AM方法進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)鈣離子的測(cè)定,缺氧心肌細(xì)胞內(nèi)Fura-2 AM結(jié)合鈣離子的能力減弱,其中缺氧+AEE 788組最弱。結(jié)論血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)對(duì)早期缺氧或缺血性損傷過程中的心肌細(xì)胞具有保護(hù)作用,VEGF的這種保護(hù)作用有望成為急性心肌梗死及缺血-再灌注損傷心肌細(xì)胞的治療靶點(diǎn)。
【關(guān)鍵詞】：低氧血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF) 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase-3) BCl-2 鈣成像
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R541.4
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-10
• 中英文縮略詞表10-12
• 引言12-14
• 材料與方法14-28
• 結(jié)果28-41
• 討論41-44
• 結(jié)論44-45
• 參考文獻(xiàn)45-50
• 綜述 血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）對(duì)梗死心肌細(xì)胞Ca2+濃度影響和可能機(jī)制50-62
• 參考文獻(xiàn)57-62
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷、在學(xué)期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文62-63
• 致謝63

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