本文關(guān)鍵詞：生發(fā)基質(zhì)—腦室內(nèi)出血對早產(chǎn)兔腦組織葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:生發(fā)基質(zhì)-腦室內(nèi)出血(germinal matrix hemorrhage-intraventricular hemorrhage,GM-IVH)是早產(chǎn)兒顱內(nèi)出血最常見的類型。在過去的幾十年中,隨著醫(yī)療技術(shù)水平及護理水平的提高,早產(chǎn)兒的存活率顯著增加,但對于孕周小,出生體重低的早產(chǎn)兒而言,GM-IVH的發(fā)病率仍是一個主要問題。GM-IVH可留有不同程度的神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥,如癲癇、認知異常、腦癱等,因此GM-IVH及其導(dǎo)致的神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥仍然是全球范圍內(nèi)的重大公共衛(wèi)生問題。當(dāng)前對于GM-IVH后繼發(fā)性腦損傷機制還不是十分清楚。早產(chǎn)兒發(fā)生GM-IVH后常常合并側(cè)腦室擴張,除對癥治療外,目前尚無有效的治療手段,腰椎穿刺是主要的對癥治療方法之一,目的是釋放出聚積在側(cè)腦室內(nèi)和腦脊液中的陳舊出血、增高的蛋白質(zhì)以及過多的腦脊液,保持腦脊液循環(huán)通路的暢通,防止側(cè)腦室持續(xù)擴張,形成嚴重的腦積水,減輕對腦組織的壓迫。通過腰椎穿刺方法,對引流出的腦脊液進行動態(tài)檢測發(fā)現(xiàn)了一個十分突出的現(xiàn)象,這類早產(chǎn)兒腦脊液糖的含量持續(xù)低于正常早產(chǎn)兒參考值,但患兒血糖正常,Volpe總結(jié)如下:這種無法用炎癥解釋的腦脊液糖濃度的降低發(fā)生于出血后第1天,5-15天最明顯,常常持續(xù)數(shù)周,最長持續(xù)至出血后3個月。大腦的能量來源主要依賴于葡萄糖,而葡萄糖從血液進入腦細胞必須通過葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白1(glucose transport1,GLUT1)和葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白3(glucose transport3,GLUT3)的介導(dǎo)。在先天性GLUT1缺乏癥的患兒中,腦脊液中糖含量低于正常值,而同一時間的血液中的糖濃度是正常的,腦脊液/血葡萄糖之比降低,乳酸的含量正�；蚪档�,CT、MRI腦部影像學(xué)正常,EEG表現(xiàn)為背景波較慢,多有彌漫性或局灶性的異常放電,患兒常表現(xiàn)為抗癲癇藥物治療無效的癲癇發(fā)作,發(fā)育遲緩,獲得性小頭畸形,共濟失調(diào)、智力低下等。目前對GM-IVH患兒腦脊液糖濃度降低的機制不清楚,是否參與了繼發(fā)性腦損傷也不清楚?最初認為腦脊液糖濃度降低是由于紅細胞的消耗和無氧糖酵解的增加,但隨后均因為腦脊液紅細胞清除后和乳酸濃度正常,糖濃度依然持續(xù)在低水平而被否決,有學(xué)者猜測可能因為出血破壞了腦內(nèi)葡萄糖的轉(zhuǎn)運導(dǎo)致了腦脊液持續(xù)的糖濃度降低。查閱文獻未見相關(guān)的報道。本實驗通過GM-IVH動物模型,應(yīng)用蛋白印跡實驗方法,定量分析了腦室周圍腦組織GLUT1、GLUT3蛋白的表達,探討GM-IVH后腦脊液糖濃度降低的可能機制,為臨床提供新的治療手段開辟思路。方法:1將懷孕29天的新西蘭孕兔進行剖宮產(chǎn),迅速將幼兔取出,并給予保溫、奶粉喂養(yǎng)。將幼兔隨機分為兩組,在生后3小時之內(nèi),其中一組的早產(chǎn)兔給予50%的丙三醇,劑量按10ml/Kg,經(jīng)腹腔注射,另一組的早產(chǎn)兔不給予任何處理。2兩組早產(chǎn)兔分別于生后24小時接受頭顱超聲檢查,觀察GM-IVH發(fā)生情況。選取接受丙三醇注射后發(fā)生GM-IVH的早產(chǎn)兔15只,為模型組,未給予任何處理的未發(fā)生GM-IVH的早產(chǎn)兔15只,為對照組,然后將兩組分別隨機分為生后24h、48h、72h三個亞組,按上述時間點給予麻醉,由內(nèi)向外迅速選取腦室周邊區(qū)域組織,一部分新鮮腦組織放入4%多聚甲醛溶液中固定,供后期蘇木精-伊紅染色(hematoxylin-eosin staining,HE),以觀察早產(chǎn)兔發(fā)生重度GM-IVH后,腦組織細胞形態(tài)的變化,另一部分新鮮腦組織立即用液氮冷凍,然后將標(biāo)本放到-80℃冰箱,供蛋白印跡實驗用,用蛋白印跡法檢測對照組與模型組早產(chǎn)兔腦組織的GLUT1蛋白和GLUT3蛋白的表達。3統(tǒng)計方法:采用SPSS13.0統(tǒng)計學(xué)軟件、Microsoft Excel 2003進行數(shù)據(jù)處理。計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±SD)表示,均數(shù)比較前先行方差齊性檢驗,不同時間點多個樣本均數(shù)的比較采用LSD法(Least-significant Difference)檢驗,兩個樣本均數(shù)的比較采用獨立樣本t檢驗(Independent Samples Test),若不滿足方差齊性檢驗則采用秩和檢驗(rank-sum test)的方法。檢驗水準(zhǔn)定為0.05,P值小于0.05有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果:1成功的建立了早產(chǎn)兔Ⅲ度GM-IVH模型通過頭顱超聲、大體標(biāo)本觀察、腦組織HE染色觀察證實早產(chǎn)兔GM-IVH模型的成功制備。2腦組織GLUT1蛋白的表達用蛋白印跡實驗方法檢測早產(chǎn)兔腦組織GLUT1的表達,對照組腦組織標(biāo)本中GLUT1表達量在生后24h、48h、72h是逐漸減少的,三個時間點間兩兩比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);模型組早產(chǎn)兔腦組織標(biāo)本中GLUT1表達量在生后24h、48h、72h三個時間點間兩兩比較亦有差異(P0.05),以生后24h最高,其次是生后48h,最后是生后72h;模型組早產(chǎn)兔腦組織標(biāo)本中GLUT1蛋白量在生后72h低于同一時間點的對照組,而生后24小時、48小時的蛋白量均高于同一時間點的對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。3腦組織GLUT3蛋白的表達用蛋白印跡實驗方法檢測早產(chǎn)兔腦組織GLUT3表達,對照組腦組織標(biāo)本中GLUT3表達量在生后24h、48h、72h是逐漸增多的,三個時間點間兩兩比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);模型組早產(chǎn)兔腦組織標(biāo)本中GLUT3表達量在生后24h、48h、72h三個時間點間兩兩比較亦有差異(P0.05),以生后48h最高,其次是生后24h,最后是生后72h,模型組早產(chǎn)兔腦組織標(biāo)本中GLUT3蛋白量在生后24h與對照驗組同一時間點相比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),72h的蛋白量低于同一時間點的對照組,而48小時的蛋白量高于同一時間點的對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:1正常早產(chǎn)兔在生后72小時內(nèi)隨著生后日齡的增長,腦部GLUT1蛋白量是減少的,而GLUT3蛋白量是增多的。2早產(chǎn)兔發(fā)生重度GM-IVH后,腦組織GLUT1表達量的上調(diào),代表一種代償反應(yīng),之后的降低導(dǎo)致了腦脊液糖濃度的降低。3早產(chǎn)兔發(fā)生重度GM-IVH后,腦組織GLUT3蛋白量有暫時性的增多,是腦部的一種保護反應(yīng),之后的減少提示參與了重度GM-IVH后繼發(fā)性腦損傷。
【關(guān)鍵詞】：早產(chǎn)兒 生發(fā)基質(zhì)-腦室內(nèi)出血 顱內(nèi)出血 動物模型 葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白 腦脊液
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R743.34
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-11
• 英文縮寫11-12
• 前言12-13
• 材料與方法13-21
• 結(jié)果21-23
• 附圖23-26
• 附表26-28
• 討論28-31
• 結(jié)論31
• 參考文獻31-35
• 綜述 葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白在神經(jīng)系統(tǒng)疾病中的意義35-45
• 參考文獻41-45
• 致謝45-46
• 個人簡歷46

【參考文獻】

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本文編號：334004