本文關(guān)鍵詞：腸外谷氨酰胺補(bǔ)充對(duì)膿毒癥大鼠淋巴器官細(xì)胞凋亡的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:膿毒癥仍是危重病的重要死亡原因之一,淋巴細(xì)胞凋亡是膿毒癥的重要病理生理機(jī)制之一,本實(shí)驗(yàn)擬研究經(jīng)腸外途徑給予不同劑量的谷氨酰胺對(duì)膿毒癥大鼠淋巴器官細(xì)胞凋亡的影響。方法:1、隨機(jī)將SD大鼠分成五組:假手術(shù)組(SHAM)、模型組(CLP)、低劑量谷氨酰胺組(L-GLN)、中劑量谷氨酰胺組(M-GLN)、高劑量谷氨酰胺組(H-GLN),采用盲腸結(jié)扎穿孔對(duì)后四組大鼠行膿毒癥模型制備,于術(shù)后立即分別給予尾靜脈注射生理鹽水、0.35g/kg谷氨酰胺、0.5g/kg谷氨酰胺、0.75g/kg谷氨酰胺,同時(shí)為了排除手術(shù)本身產(chǎn)生的影響,對(duì)行假手術(shù)的大鼠尾靜脈注射生理鹽水作為假手術(shù)組。2、觀察記錄各組大鼠術(shù)后的表現(xiàn),在各組大鼠造模24小時(shí)后于腹腔麻醉下,測(cè)量大鼠肛溫、呼吸、心率,通過(guò)頸總動(dòng)脈采血、離心,取血清備用檢測(cè),同時(shí)隨機(jī)對(duì)各組3只大鼠進(jìn)行頸總動(dòng)脈采血行血培養(yǎng),取脾臟、胸腺標(biāo)本于10%甲醛固定后,包埋切片做免疫組化。3、原位末端標(biāo)記法(TUNEL)測(cè)胸腺、脾臟的細(xì)胞凋亡,免疫組化測(cè)caspase3、Hsp 90在胸腺、脾臟組織中的表達(dá),酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)測(cè)大鼠血清Ig A、Ig G、Ig M水平及血清TNF-α、IL-10水平。結(jié)果:1、確認(rèn)膿毒癥大鼠動(dòng)物模型成功建立:腹腔麻醉下監(jiān)測(cè)各組大鼠肛溫、呼吸、心率,與假手術(shù)組比較,模型組及低、中、高劑量谷氨酰胺組大鼠肛溫降低大于1℃,呼吸頻率增快2倍以上,心率增加超過(guò)50%,符合SIRS動(dòng)物模型診斷標(biāo)準(zhǔn),通過(guò)解剖腹腔可見(jiàn):腹腔大量血性帶惡臭滲出物,結(jié)扎盲腸端發(fā)黑、表面見(jiàn)黃色膿液等腹腔感染原發(fā)病灶表現(xiàn),同時(shí),模型組及低、中、高劑量谷氨酰胺組隨機(jī)抽取的血培養(yǎng)均培養(yǎng)出混合菌的感染證據(jù),據(jù)此可認(rèn)為盲腸結(jié)扎穿孔膿毒癥大鼠造模成功。2、各組大鼠脾臟、胸腺細(xì)胞凋亡指數(shù)結(jié)果:假手術(shù)組大鼠脾臟、胸腺存在較低的細(xì)胞凋亡;模型組大鼠脾臟、胸腺存在明顯的細(xì)胞凋亡,與假手術(shù)組比較具有顯著差異(p0.01);低、中、高劑量谷氨酰胺組大鼠脾臟、胸腺細(xì)胞凋亡較模型組逐漸減少(p0.05或p0.01);高劑量谷氨酰胺組抗細(xì)胞凋亡作用優(yōu)于低劑量谷氨酰胺組(p0.05)。3、各組大鼠脾臟、胸腺caspase 3蛋白的陽(yáng)性表達(dá)結(jié)果:假手術(shù)組大鼠脾臟、胸腺caspase 3蛋白存在較低的陽(yáng)性表達(dá);模型組與假手術(shù)組比較大鼠脾臟、胸腺caspase 3蛋白陽(yáng)性表達(dá)積分顯著增高(p0.01);低、中、高劑量谷氨酰胺組較模型組大鼠脾臟、胸腺caspase 3蛋白陽(yáng)性表達(dá)積分逐漸下降(p0.05或p0.01);高劑量谷氨酰胺組大鼠脾臟、胸腺caspase 3的陽(yáng)性表達(dá)積分較低劑量谷氨酰胺低(p0.01)。4、各組大鼠脾臟、胸腺Hsp 90蛋白的陽(yáng)性表達(dá)結(jié)果:假手術(shù)組大鼠脾臟、胸腺Hsp 90存在較低的陽(yáng)性表達(dá);模型組較假手術(shù)組大鼠脾臟、胸腺Hsp 90蛋白陽(yáng)性表達(dá)積分顯著增高(p0.01);低、中、高劑量谷氨酰胺組較模型組大鼠脾臟、胸腺Hsp 90陽(yáng)性表達(dá)積分逐漸增加(p0.05或p0.01);高劑量谷氨酰胺組大鼠脾臟、胸腺Hsp 90的陽(yáng)性表達(dá)積分較低劑量谷氨酰胺組高(p0.01)。5、各組大鼠血清Ig M、Ig G、Ig A水平:模型組大鼠血清Ig A、Ig M、Ig G水平均較假手術(shù)組顯著降低(p0.01),低、中、高劑量谷氨酰胺組大鼠血清Ig A、Ig M、Ig G水平均高于模型組(p0.01或p0.05),高劑量谷氨酰胺組大鼠血清Ig A、Ig M水平高于低劑量谷氨酰胺組(p0.01或p0.05)。6、各組大鼠血清TNF-a、IL-10水平:模型組大鼠血清TNF-a、IL-10水平均顯著高于假手術(shù)組(p0.01),低、中、高劑量谷氨酰胺組與模型組比較大鼠血清TNF-ɑ水平均顯著降低(p0.01),高劑量谷氨酰胺組較低劑量谷氨酰胺組大鼠血清TNF-ɑ水平更低(p0.05)。結(jié)論:腸外谷氨酰胺補(bǔ)充可抑制膿毒癥大鼠淋巴器官細(xì)胞凋亡,且抗細(xì)胞凋亡作用與谷氨酰胺給藥劑量呈正相關(guān)性,谷氨酰胺可能是通過(guò)誘導(dǎo)Hsp90的表達(dá),抑制caspase-3的活化,發(fā)揮抗細(xì)胞凋亡作用。
【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R459.7
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-10
• 中英文縮略詞表10-12
• 第1章 前言12-14
• 第2章 材料與方法14-22
• 2.1 材料14-16
• 2.1.1 主要儀器及廠家14
• 2.1.2 主要試劑及廠家14-15
• 2.1.3 常用試劑配制15-16
• 2.2 方法16-22
• 2.2.1 實(shí)驗(yàn)對(duì)象、分組及大鼠動(dòng)物模型建立16
• 2.2.2 大鼠體溫、呼吸、心率的測(cè)定16-17
• 2.2.3 標(biāo)本采集和制備17-18
• 2.2.4 標(biāo)本的檢測(cè)18-20
• 2.2.5 檢測(cè)結(jié)果判定20-21
• 2.2.6 統(tǒng)計(jì)方法21-22
• 第3章 結(jié)果22-27
• 3.1 各實(shí)驗(yàn)大鼠基本情況22
• 3.2 各組大鼠術(shù)后體溫、呼吸、心率的觀察22-23
• 3.3 各組大鼠血培養(yǎng)結(jié)果23
• 3.4 各組大鼠脾臟、胸腺細(xì)胞凋亡檢測(cè)結(jié)果23-24
• 3.5 各組大鼠脾臟、胸腺組織caspase3、Hsp90蛋白表達(dá)結(jié)果24-25
• 3.6 各組大鼠血清IgA、IgM、IgG檢測(cè)結(jié)果25-26
• 3.7 各組大鼠TNF-ɑ、IL-10檢測(cè)結(jié)果26-27
• 第4章 討論27-33
• 4.1 膿毒癥大鼠模型的成功建立27
• 4.2 淋巴細(xì)胞異常凋亡是膿毒癥的重要的病理生理機(jī)制之一27-29
• 4.3 谷氨酰胺與熱休克蛋白90的表達(dá)29-30
• 4.4 熱休克蛋白90與細(xì)胞凋亡30-31
• 4.5 各組大鼠IgA、IgM、IgG水平的變化及其意義31
• 4.6 各組大鼠促炎與抗炎因子的變化及其分析31-33
• 第5章 結(jié)論與展望33-34
• 5.1 結(jié)論33
• 5.2 展望33-34
• 致謝34-35
• 參考文獻(xiàn)35-37
• 附圖37-41
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果41-42
• 綜述42-48
• 參考文獻(xiàn)46-48

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：326905