本文關(guān)鍵詞：頭部淺低溫對全腦缺血再灌注損傷大鼠海馬細胞線粒體膜電位及細胞凋亡的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:阻斷大鼠雙側(cè)椎動脈和雙側(cè)頸總動脈造成全腦缺血,開放血管后造成再灌注損傷,經(jīng)鼻咽腔實施冷鹽水灌注來降低大腦深部溫度,實現(xiàn)頭部的淺低溫,通過檢測缺血再灌損傷后大鼠海馬細胞線粒體膜電位的變化,以及觀察海馬CA1區(qū)Bcl-2,Bax蛋白,細胞色素C(Cytochrome C,Cyt C)蛋白和Pro-Caspase-3蛋白的表達,來探究線粒體膜電位變化與細胞凋亡的關(guān)系,以及頭部淺低溫減少缺血再灌注損傷的理論基礎(chǔ)。方法:1實驗動物分組36只清結(jié)級成年Wistart大鼠,均為雄性,體重250~280g。隨機分成3組,每組12只,標(biāo)記為假手術(shù)組即S組,缺血再灌注組即I/R組,頭部淺低溫缺血再灌注組即HI/R組。2實驗?zāi)Ｐ偷慕⒁约邦^部淺低溫的實施基于大鼠全腦四血管供血的解剖學(xué)基礎(chǔ)[1,3],永久性閉塞雙側(cè)椎動脈后,夾閉雙側(cè)頸總動脈造成全腦缺血,開放動脈夾復(fù)灌制造缺血再灌注損傷模型,經(jīng)鼻咽降溫實現(xiàn)頭部淺低溫。大鼠禁食大于8小時,記錄體重,腹腔注射水合氯醛麻醉,待其對針尖刺激無反應(yīng)后俯臥固定,在顱骨下觸及第一頸椎,沿中線切開分離組織直至脊椎骨,暴露椎旁兩側(cè)翼小孔,用電燒尖燒閉雙側(cè)椎動脈,檢驗無出血后逐層縫合。觀察24h再次麻醉大鼠,仰臥固定,插入氣管導(dǎo)管,持續(xù)吸入七氟醚,經(jīng)鼠頸分離雙側(cè)粗大頸總動脈,準(zhǔn)備動脈夾。S組大鼠僅分離出雙側(cè)翼小孔和頸總動脈,不予其它處理。I/R組,HI/R組均燒灼翼小孔閉塞椎動脈,夾閉雙側(cè)頸總動脈15min,開放灌注24小時。其中HI/R組在氣管插管后于鼻腔置入管路,灌注4℃晶體液降低腦溫,待海馬區(qū)溫度達33℃時進行雙側(cè)頸總動脈夾閉,開放動脈復(fù)灌1小時后停止降溫,自然復(fù)溫。3.實驗樣本提取及檢測方法3.1 JC-1 熒光法顯微鏡下觀察大鼠海馬細胞線粒體膜電位變化每組取大鼠4只,腹腔注射10%水合氯醛麻醉后迅速斷頭,取出大腦放于冰盤上分離海馬組織,標(biāo)本參照線粒體提取試劑盒使用方法提取線粒體,操作過程于低溫環(huán)境下進行,標(biāo)本用于線粒體膜電位的觀察。3.2 Western Blot法測定Caspase-3酶原每組取再灌注24小時大鼠4只,10%水合氯醛進行麻醉,于鼠頸根部斷頭,低溫下分取鼠腦海馬組織,置于冷凍管密封,在液氮罐中快速超低溫冰凍標(biāo)本,再轉(zhuǎn)移到-80℃冰箱長時間保存。標(biāo)本用Western Blot方法測定Caspase-3酶原表達。3.3免疫組化法觀察海馬CA1區(qū)Cyt C蛋白,Bcl-2及Bax蛋白表達每組取大鼠4只麻醉,剪開胸廓于心尖處插入細針,以0.9%氯化鈉灌注清洗血管,再以4%多聚甲醛溶液灌流固定,待大鼠全身僵直后即刻斷頭取腦分離海馬組織,標(biāo)本放入4%多聚甲醛溶液中繼續(xù)固定,4℃保存,用免疫組化法觀察Cyt C蛋白,Bcl-2蛋白及Bax蛋白。結(jié)果:1大鼠海馬CA1區(qū)Caspase-3酶原表達相比于S組,I/R組Caspase-3酶原蛋白量減少,HI/R組Caspase-3酶原蛋白量減少,差異顯著,有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);相比于I/R組,HI/R組Caspase-3酶原蛋白量增加,差異顯著,有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。2大鼠海馬CA1區(qū)Cyt C蛋白表達相比于S組,I/R組,HI/R組Cyt C蛋白表達均明顯增加,有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05);相比于I/R組,HI/R組Cyt C蛋白表達明顯減少,有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。3大鼠海馬CA1區(qū)Bcl-2、Bax蛋白表達相比于S組,I/R組,HI/R組Bcl-2蛋白,Bax蛋白表達均明顯增加,有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05);相比于I/R組,HI/R組Bcl-2蛋白表達明顯增加,Bax蛋白表達明顯減少,兩者均有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。4大鼠海馬CA1區(qū)細胞線粒體膜電位的觀察S組在JC-1熒光濾片上觀察為高紅高綠(綠++紅++),染料聚集明顯,是膜電位正常時的熒光圖像;與S組比較,I/R組明顯表現(xiàn)為低紅高綠(綠++紅),紅色熒光下僅有極少量染料聚集呈現(xiàn)亮紅色,反映膜電位明顯下降;與S組比較,HI/R組表現(xiàn)為中紅高綠(綠++紅+),紅色熒光下看到較3實驗樣本提取及檢測方法3.1 JC-1熒光法顯微鏡下觀察大鼠海馬細胞線粒體膜電位變化多染料聚集,反映膜電位下降。與I/R組比較,HI/R組紅綠熒光圖像差異不明顯,反映膜電位下降少于I/R組。結(jié)論:1頭部淺低溫可影響大鼠全腦缺血再灌注損傷后海馬細胞線粒體膜電位以及細胞凋亡;線粒體膜電位的變化與細胞凋亡密切相關(guān)。2頭部淺低溫可降低大鼠全腦缺血再灌注損傷,具有神經(jīng)保護作用。
【關(guān)鍵詞】：淺低溫 缺血再灌注損傷 線粒體膜電位 細胞凋亡 神經(jīng)保護
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R651.1
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-11
• 前言11
• 材料與方法11-19
• 結(jié)果19-21
• 附圖21-29
• 附表29-31
• 討論31-37
• 結(jié)論37
• 參考文獻37-40
• 綜述 缺血再灌注的損傷機制與線粒體跨膜電位40-47
• 參考文獻45-47
• 致謝47-48
• 個人簡歷48

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 龐鶴;朱陵群;王碩仁;牛福玲;崔巍;;清開靈注射液對神經(jīng)細胞凋亡和線粒體膜電位的影響[J];北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報;2006年02期

2 張杰;劉禎;景鵬;李國君;;細胞線粒體膜電位的測量方法[J];首都醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2006年01期

3 沈斌;Xu Haoliang;;線栓法制備SD大鼠局灶性腦缺血/再灌注模型的改良研究[J];首都醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2007年06期

4 李兵,章翔,蔣曉帆,王彥剛,曹衛(wèi)東;改良四血管阻塞法建立大鼠全腦缺血模型[J];中華神經(jīng)外科疾病研究雜志;2005年02期

  本文關(guān)鍵詞：頭部淺低溫對全腦缺血再灌注損傷大鼠海馬細胞線粒體膜電位及細胞凋亡的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：321381