本文關(guān)鍵詞：高脂膳食和大黃素對組織細胞中HIF-1α和PFK-2表達影響的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究目的:攝入富含飽和脂肪酸的高脂膳食會導(dǎo)致肥胖并發(fā)生代謝紊亂,如糖代謝紊亂和血脂異常等。此時,抗氧化系統(tǒng)亦可能失調(diào),并導(dǎo)致氧化應(yīng)激,從而引起一些細胞轉(zhuǎn)錄因子表達的改變,缺氧誘導(dǎo)因子-1α(HIF-1α)即是其中之一。HIF-1α是具有轉(zhuǎn)錄活性的核蛋白,缺氧條件下普遍存在于人和哺乳動物細胞內(nèi),并可調(diào)節(jié)多種目標基因,其中包括與糖脂代謝相關(guān)的磷酸果糖激酶-2(PFK-2)等;然而目前,HIF-1α的研究常見于癌細胞中,在正常哺乳動物細胞中,高脂膳食對其表達是否有影響的研究較少見。大黃素作為中藥的有效成分具有許多功能,如利尿、抗菌、抗病毒、抗?jié)�、抗炎以及抗癌等。近年來許多報告表明,大黃素能有效抑制多種細胞信號通路,并可改善糖脂代謝。其是否通過影響HIF-1α表達而改善代謝紊亂尚不清楚。本文的研究目的是探討高脂膳食對主要臟器(肝臟、腎臟、骨骼肌以及脂肪組織)細胞中缺氧誘導(dǎo)因子-1α(HIF-1α)和磷酸果糖激酶-2(PFK-2)表達的影響,同時探討大黃素是否能改善兩者的表達。方法:1.四十只四周齡的C57BL/6小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后,隨機分為兩組,一組喂以正常膳食,另一組喂以高脂膳食(其中含豬油60%)。每四周記錄小鼠體重、進食量變化。喂養(yǎng)28周后,把兩組動物按體重分別平均再分成兩組,即形成四組:對照組(CD)、對照用藥組(CE)、高脂組(HD)和高脂用藥組(HE)。然后,CE組和HE組小鼠以大黃素灌胃給藥(每天80mg/kg體重),CD組和HD組小鼠給予同劑量生理鹽水灌胃。每天用藥一次持續(xù)兩周,并記錄小鼠體重以及攝食情況。2.用藥結(jié)束后將小鼠饑餓過夜,隨后所有小鼠內(nèi)眥靜脈取血,麻醉致死后取其肝臟、腎臟、附睪脂肪和骨骼肌組織,稱重后放入液氮中保存?zhèn)溆�。�?yīng)用ELISA試劑盒檢測小鼠血漿中葡萄糖、甘油三酯和總膽固醇的含量。應(yīng)用Western Bolt方法檢測小鼠四種組織中HIF-1α和PFK-2蛋白的表達情況。3.選擇和小鼠組織相對應(yīng)的四種細胞,即hepg2人肝癌細胞、y1小鼠腎上腺皮質(zhì)瘤細胞、3t3-l1小鼠成纖維細胞以及c2c12小鼠成肌細胞。3t3-l1小鼠成纖維細胞和c2c12小鼠成肌細胞先進行分化培養(yǎng)成為成熟的脂肪細胞和肌管細胞。隨后,四種細胞在六孔板中分別給予終濃度為0,20,50,100,200μmol/l的大黃素,并厭氧培養(yǎng)6小時。然后提取細胞蛋白,用westernblot檢測四種細胞中hif-1α和pfk-2蛋白的表達情況。結(jié)果:1.高脂膳食喂養(yǎng)小鼠第20周開始,該組小鼠體重高于普通膳食喂養(yǎng)的對照組小鼠,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.01)。大黃素給藥后,ce組和he組小鼠體重分別略低于cd組和hd組,但無統(tǒng)計學(xué)意義。2.與對照組相比,高脂組中附睪脂肪臟體比升高(p0.01)。肝臟、腎臟以及骨骼肌組織臟體比在四組之間差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義。3.血糖、膽固醇及甘油三酯在給予高脂膳食及大黃素干預(yù)下沒有出現(xiàn)統(tǒng)計學(xué)差異。4.肝臟組織中,高脂膳食可以增加hif-1α和pfk-2的表達(p0.05,p0.01);無論是正常膳食還是高脂膳食喂養(yǎng)的小鼠,在應(yīng)用大黃素后可以抑制其肝臟hif-1α和pfk-2的表達(p0.05,p0.01)。腎臟組織中,大黃素降低了不同膳食處理的小鼠pfk-2的表達(p0.05)。在骨骼肌組織中,與對照組相比,高脂膳食使hif-1α的表達升高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05),但大黃素未能降低其表達;四組中pfk-2表達的差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義。附睪脂肪組織中,四組中hif-1α和pfk-2均有表達,但表達差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義。5.在hepg2細胞中,與對照組(e0)相比,大黃素100μmol/l和200μmol/l劑量組細胞中hif-1α蛋白的表達降低(p0.05);以大黃素50μmol/l、100μmol/l和200μmol/l劑量處理的細胞中pfk-2蛋白的表達降低(p0.05)。在y1細胞中,200μmol/l劑量的大黃素可抑制hif-1α和pfk-2蛋白的表達(p0.05)。而在3t3-l1和c2c12細胞中,應(yīng)用大黃素處理后,hif-1α和pfk-2蛋白的表達沒有明顯的改變。結(jié)論: 1.高脂膳食可誘導(dǎo)小鼠肥胖,并增加肝臟組織中HIF-1α和PFK-2蛋白的表達;應(yīng)用大黃素后可降低兩者蛋白表達的增加。2.無論是正常膳食還是高脂膳食喂養(yǎng)的小鼠,應(yīng)用大黃素后,其腎臟組織中PFK-2的表達下降了。高脂膳食可使骨骼肌組織中HIF-1α的表達升高,但大黃素未能降低其表達。在四種處理組中,脂肪組織均有HIF-1α和PFK-2較明顯表達,但大黃素處理后未出現(xiàn)明顯改變。3.在肝癌HepG2及腎癌Y1細胞中,大黃素可以降低HIF-1α和PFK-2的表達。而在本研究中未觀察到大黃素對肌細胞C2C12和脂肪細胞3T3-L1中HIF-1α和PFK-2表達的影響。
【關(guān)鍵詞】：高脂膳食 大黃素 缺氧誘導(dǎo)因子-1α 磷酸果糖激酶-2 臟器
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R151
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-13
• 縮略語/符號說明13-14
• 前言14-18
• 研究現(xiàn)狀、成果14-16
• 研究目的、方法16-18
• 一、高脂膳食和大黃素對小鼠組織中HIF-1α和PFK-2 表達的影響18-35
• 1.1 材料18-21
• 1.1.1 動物18
• 1.1.2 主要試劑18-19
• 1.1.3 主要溶液及配制19-21
• 1.1.4 主要儀器和設(shè)備21
• 1.2 方法21-26
• 1.2.1 動物分組與喂養(yǎng)21
• 1.2.2 大黃素處理21-22
• 1.2.3 標本采集及保存22
• 1.2.4 血液生化指標測定22-24
• 1.2.5 Western Blot測定小鼠組織HIF-1α和PFK-2 的蛋白水平24-26
• 1.2.6 統(tǒng)計學(xué)處理26
• 1.3 結(jié)果26-31
• 1.3.1 高脂膳食喂養(yǎng)后小鼠體重變化情況26-27
• 1.3.2 大黃素對小鼠體重及臟體比的影響27-28
• 1.3.3 血糖血脂檢測結(jié)果28-29
• 1.3.4 小鼠組織中HIF-1α和PFK-2 的表達情況29-31
• 1.4 討論31-34
• 1.5 小結(jié)34-35
• 二、大黃素對細胞中HIF-1α和PFK-2 表達的影響35-46
• 2.1 材料35-38
• 2.1.1 細胞35
• 2.1.2 主要試劑35
• 2.1.3 主要溶液劑配制35-37
• 2.1.4 主要儀器37-38
• 2.2 方法38-39
• 2.2.1 3T3-L1小鼠胚胎成纖維細胞的分化38
• 2.2.2 C2C12小鼠成肌細胞的分化38-39
• 2.2.3 HEPG2和Y1細胞的培養(yǎng)39
• 2.2.4 細胞給藥處理39
• 2.2.5 細胞蛋白的提取39
• 2.2.6 Western Blot測定細胞中HIF-1α和PFK-2 蛋白水平39
• 2.2.7 統(tǒng)計學(xué)處理39
• 2.3 結(jié)果39-43
• 2.3.1 3T3-L1小鼠胚胎成纖維細胞分化結(jié)果39-40
• 2.3.2 C2C12小鼠成肌細胞分化結(jié)果40-41
• 2.3.3 大黃素對四種細胞中HIF-1α和PFK-2 蛋白表達的影響41-43
• 2.4 討論43-44
• 2.5 小結(jié)44-46
• 結(jié)論46-47
• 參考文獻47-52
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明52-53
• 綜述 HIF-1α與糖酵解及大黃素的研究進展53-66
• 參考文獻61-66
• 致謝66

  本文關(guān)鍵詞：高脂膳食和大黃素對組織細胞中HIF-1α和PFK-2表達影響的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：297010