發(fā)布時間：2017-04-01 07:01

  本文關(guān)鍵詞：托吡酯對偏頭痛模型大鼠三叉神經(jīng)節(jié)中A2AR的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：通過對硝酸甘油偏頭痛模型大鼠使用偏頭痛的預(yù)防藥物托吡酯(topiramate, TPM)、氟桂利嗪(flunarizine, FNZ)干預(yù)后,留取大鼠三叉神經(jīng)節(jié)組織,檢測各組大鼠三叉神經(jīng)節(jié)中腺苷2A受體(adenosine 2A receptor,A2AR)蛋白的表達量及降鈣素基因相關(guān)肽(calcitonin gene related peptide, CGRP)的含量變化。證實托吡酯可能通過抑制A2AR表達減少CGRP的釋放從而預(yù)防偏頭痛的發(fā)作,也為托吡酯預(yù)防性治療偏頭痛的作用機制提供新的實驗和理論依據(jù)。方法：1.分組：選取月齡為3-4個月及體重180-200g的清潔級健康成年雄性Sprague-Dawley (SD)大鼠40只,按照隨機數(shù)字表法,隨機將所有SD大鼠分為4組,每組10只,依次分為：空白組、模型組、托吡酯組(以下簡稱TPM組)、氟桂利嗪組(以下簡稱FNZ組)。2.造模：在空白組大鼠頸背部皮下注入生理鹽水(NS)10ml/kg,其余3組則依照Tassorelli法在大鼠頸背部皮下注射硝酸甘油(nitroglycerin, NTG) 10 mg (2ml)/kg,按上述方法每周1次,共5周,每次注射完畢后對各組大鼠進行行為學(xué)評分。3.藥物干預(yù)：從第2周開始,每天1次按時對各組大鼠予以灌胃：空白組NS 10ml/kgd、模型組NS 10ml/kg/d、FNZ組氟桂利嗪1.25mg/Kg/d、TPM組托吡酯9mg/kg/d。4.取材：第5周各組大鼠注射藥物、灌胃4小時后,腹腔注射10%水合氯醛3ml/kg進行麻醉,待大鼠完全麻醉后剖胸,心臟灌注,斷頭、開顱、分離腦組織及硬腦膜,暴露顱底三叉神經(jīng)節(jié),攝取中間完整部分(約2-3cm)用4%多聚甲醛固定,部分保存于4℃冰箱(用于HE染色、免疫組化),部分保存于液氮中(用于western-blot)。5.檢測：①取各組部分三叉神經(jīng)節(jié)組織行HE染色,顯微鏡下觀察組織結(jié)構(gòu)變化；②免疫組織化學(xué)(SP法)檢測CGRP在各組偏頭痛大鼠三叉神經(jīng)節(jié)中含量變化；③免疫熒光法檢測A2AR蛋白在三叉神經(jīng)節(jié)組織神經(jīng)元中的表達情況；④Western- blot法檢測A2AR蛋白表達量的變化。6.對檢測結(jié)果應(yīng)用SPSS 17.0軟件行統(tǒng)計學(xué)分析。結(jié)果：1.注射硝酸甘油后各組大鼠行為學(xué)評分：模型組與空白組比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)；兩種藥物干預(yù)組(即FNZ組和TPM組)分別與模型組比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01);兩藥物干預(yù)組間相互比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)。2.HE染色顯示：各組鏡下觀察三叉神經(jīng)節(jié)結(jié)構(gòu)基本一致,無顯著差異。3.免疫組化法檢測CGRP的含量：測其OD值顯示CGRP在各組三叉神經(jīng)組織中的表達差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01),其中模型組明顯高于空白組,FNZ組高于空白組和TPM組但低于模型組,TPM組高于空白組且低于模型組和FNZ組。4.免疫熒光雙重染色檢測A2AR的表達：在三叉神經(jīng)節(jié)組織中A2AR蛋白主要表達于神經(jīng)元細胞,各組三叉神經(jīng)節(jié)上表達A2AR的陽性神經(jīng)元細胞數(shù)差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)；其中TPM組的熒光強度和陽性細胞數(shù)均明顯低于模型組及FNZ組,與空白組相近。5.Western -blot檢測A2AR的蛋白表達量：測其灰度值顯示A2AR在各組中的表達差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01),其中空白組和TPM組的A2AR蛋白表達量均明顯低于模型組和FNZ組。6.模型組中CGRP的OD值與A2AR灰度值行相關(guān)分析的結(jié)果顯示差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)。結(jié)論：1.硝酸甘油偏頭痛模型大鼠三叉神經(jīng)組織無解剖結(jié)構(gòu)上的改變,提示大鼠行為學(xué)改變可能是功能性的異常。2.A2AR的激活或蛋白上調(diào)和CGRP的大量釋放可能參與了偏頭痛的發(fā)生機制,且兩者的變化趨勢一致。3.經(jīng)典偏頭痛預(yù)防治療用藥氟桂利嗪可能通過抑制三叉神經(jīng)感覺纖維末梢CGRP的釋放來達到預(yù)防治療偏頭痛的效果,但對A2AR蛋白表達無影響。4.托吡酯可能通過抑制A2AR的激活或下調(diào)其蛋白表達繼而抑制CGRP的釋放達到預(yù)防偏頭痛發(fā)作及減輕偏頭痛癥狀的效果。5.托吡酯對偏頭痛的療效還可能優(yōu)于氟桂利嗪。
【關(guān)鍵詞】：托吡酯 A2AR CGRP 偏頭痛 SD大鼠
【學(xué)位授予單位】：四川醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R747.2;R-332
【目錄】：

• 中文摘要3-6
• 英文摘要6-9
• 前言9-14
• 材料與方法14-24
• 結(jié)果24-33
• 討論33-38
• 結(jié)論38-39
• 參考文獻39-44
• 英漢縮略詞對照表44-45
• 致謝45-46
• 亞甲基四氫葉酸還原酶基因多態(tài)性對偏頭痛的影響(綜述)46-54
• 參考文獻52-54

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本文編號：280157